Browsing by Author "Yuseff Sepúlveda, María Isabel"
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- ItemA cytoplasmic PPPSP motif determines Megalin's phosphorylation and regulates receptor's recycling and surface expression(2007) Yuseff Sepúlveda, María Isabel; Marzolo Canales, María Paz
- ItemActin nucleation at the centrosome controls lymphocyte polarity(2016) Obino, D.; Fariña, F.; Malbec, O.; Sáez, P.; Maurin, M.; Gaillard, J.; Dingli, F.; Loew, D.; Gautreau, A.; Yuseff Sepúlveda, María Isabel; Blanchoin, L.; Théry, M.; Lennon-Duménil A.
- ItemB cells use conserved polarity cues to regulate their antigen processing and presentation functions(2015) Yuseff Sepúlveda, María Isabel; Lennon Duménil, A.
- ItemDopaminergic stimulation leads B-cell infiltration into the central nervous system upon autoimmunity(2021) Prado, Carolina; Osorio Barrios, Francisco; Falcón, Paulina; Espinoza, Alexandra; Saez, Juan José; Yuseff Sepúlveda, María Isabel; Pacheco, RodrigoAbstract Background Recent evidence has shown dopamine as a major regulator of inflammation. Accordingly, dopaminergic regulation of immune cells plays an important role in the physiopathology of inflammatory disorders. Multiple sclerosis (MS) is an inflammatory disease involving a CD4+ T-cell-driven autoimmune response to central nervous system (CNS) derived antigens. Evidence from animal models has suggested that B cells play a fundamental role as antigen-presenting cells (APC) re-stimulating CD4+ T cells in the CNS as well as regulating T-cell response by mean of inflammatory or anti-inflammatory cytokines. Here, we addressed the role of the dopamine receptor D3 (DRD3), which displays the highest affinity for dopamine, in B cells in animal models of MS. Methods Mice harbouring Drd3-deficient or Drd3-sufficient B cells were generated by bone marrow transplantation into recipient mice devoid of B cells. In these mice, we compared the development of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by immunization with a myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG)-derived peptide (pMOG), a model that leads to CNS-autoimmunity irrespective of the APC-function of B cells, or by immunization with full-length human MOG protein (huMOG), a model in which antigen-specific activated B cells display a fundamental APC-function in the CNS. APC-function was assessed in vitro by pulsing B cells with huMOG-coated beads and then co-culturing with MOG-specific T cells. Results Our data show that the selective Drd3 deficiency in B cells abolishes the disease development in the huMOG-induced EAE model. Mechanistic analysis indicates that although DRD3-signalling did not affect the APC-function of B cells, DRD3 favours the CNS-tropism in a subset of pro-inflammatory B cells in the huMOG-induced EAE model, an effect that was associated with higher CXCR3 expression. Conversely, the results show that the selective Drd3 deficiency in B cells exacerbates the disease severity in the pMOG-induced EAE model. Further analysis shows that DRD3-stimulation increased the expression of the CNS-homing molecule CD49d in a B-cell subset with anti-inflammatory features, thus attenuating EAE manifestation in the pMOG-induced EAE model. Conclusions Our findings demonstrate that DRD3 in B cells exerts a dual role in CNS-autoimmunity, favouring CNS-tropism of pro-inflammatory B cells with APC-function and promoting CNS-homing of B cells with anti-inflammatory features. Thus, these results show DRD3-signalling in B cells as a critical regulator of CNS-autoimmunity.
- ItemGalectin-8 Favors the Presentation of Surface-Tethered Antigens by Stabilizing the B Cell Immune Synapse(2018) Obino, Dorian; Fetler, Luc; Soza Gajardo, Andrea; Malbec, Odile; Saez, Jose; Labarca, Mariana; Oyanadel, Claudia; Del Valle Batalla, Felipe; Goles, Nicolas; Chikina, Aleksandra; Lankar, Danielle; Yuseff Sepúlveda, María Isabel; Segovia Miranda, Fabián Josué; Garcia, Camille; Léger, Thibaut; Gonzalez, Alfonso; Espéli, Marion; Lennon-Duménil, Ana-Maria
- ItemKDEL receptor regulates secretion by lysosome relocation- and autophagy-dependent modulation of lipid-droplet turnover(2019) Tapia, Diego; Zamora, Constanza; Espinoza, Javier; Rizzo, Riccardo; González Cárdenas, Alexis; Fuentes Peña, Danitza Natalia; Hernández, Sergio; Cavieres, Viviana A.; Guzmán, Fanny; Arriagada, Gloria; Yuseff Sepúlveda, María Isabel; Mardones, Gonzalo A.; Burgos , Patricia V.; Luini, Alberto; González, Alfonso; Cancino, Jorge; Jiménez, Tomás; Soza Gajardo, Andrea
- ItemMecanosensibilidad en linfocitos B: rol en la dinámica y funcionalidad de lisosomas durante la sinapsis inmunológica(2023) Valle Batalla, Felipe Andrés del; Yuseff Sepúlveda, María Isabel; Pontificia Universidad Católica de Chile. Facultad de Ciencias BiológicasEl estudio de la mecanosensibilidad celular representa una rama de la biología que recientemente ha ganado mucho interés, reflejado en el premio Nobel de fisiología y medicina de 2021 otorgado a Ardem Patapoutian por el descubrimiento y caracterización del mecano-receptor PIEZO1. Sin embargo, poco se ha estudiado sobre cómo las señales mecánicas provenientes del entorno extracelular pueden dictar el funcionamiento del sistema inmune, y en particular, de los linfocitos B: las únicas células capaces de producir anticuerpos. En este trabajo se estudió cómo las propiedades físicas de la superficie presentadora de antígenos influyen en la capacidad de las células B para extraer antígenos inmovilizados y cómo estos procesos están conectados. Se encontró que, al interactuar con sustratos más rígidos, las células B experimentan respuestas de estiramiento celular aumentadas y mayor acetilación de tubulina, específicamente en el centro de la sinapsis inmunológica. En sustratos rígidos, los lisosomas se ubican en el centro de la sinapsis, lo que reduce su movilidad en comparación con sustratos más blandos. Los lisosomas además muestran una preferencia por asociarse con tubulina acetilada en contextos de mayor rigidez. Mecanísticamente, esto implica la translocación de ATAT1, una enzima acetilasa de microtúbulos, del núcleo al citoplasma de las células B, actuando como señal mecánica durante la estimulación del BCR. El silenciamiento de ATAT1 en células B disminuye su capacidad para estabilizar los lisosomas en la interfaz sináptica, lo que resulta en una extracción y presentación reducidas de antígenos inmovilizados a las células T. Estos hallazgos sugieren una vía que conecta la extracción de antígenos con señales mecánicas provenientes de células presentadoras de antígenos. En resumen, esta investigación aporta nuevos conocimientos y ofrece una base para comprender mejor las respuestas inmunológicas, con posibles implicaciones en terapias y trastornos inmunológicos.
- ItemPolarity protein Par3 controls B-cell receptor dynamics and antigen extraction at the immune synapse(2015) Reversat, A.; Yuseff Sepúlveda, María Isabel
- ItemProteasome dependent actin remodeling facilitates antigen extraction at the immune synapse of B cells(2019) Ibanez Vega, J.; Del Valle Batalla, Felipe; Saez, J.J.; Soza Gajardo, Andrea; Yuseff Sepúlveda, María Isabel
- ItemRegulación de la autofagia por señales inflamatorias y su impacto en la presentación de antígenos en linfocitos B(2020) Lagos Orellana, Jonathan Alexander; Yuseff Sepúlveda, María Isabel; Zanlungo Matsuhiro, Silvana; Pontificia Universidad Católica de Chile. Facultad de MedicinaEn la última década el inesperado éxito de las terapias depletivas de linfocitos B ha puesto el foco en estas células, no tan solo como células productoras de anticuerpos, sino que también como secretoras de citoquinas y células presentadoras de antígenos. Para cumplir estas funciones el linfocito B se activa mediante el reconocimiento de un antígeno, frecuentemente inmovilizado en la superficie de una célula presentadora. Esto gatilla la formación de una sinapsis inmune, donde se coordina la extracción, procesamiento en compartimientos endo-lisosomales y presentación del antígeno a linfocitos T. Estos compartimientos también participan en la homeostasis celular a través de la autofagia, la cual es permite la degradación de organelos y macromoléculas. Además de ello, la autofagia regula la señalización de receptores tipo Toll (TLR) que reconocen patrones de peligro asociados a patógenos. Esta regulación es importante para limitar la generación de centros germinales y la producción de autoinmunidad asociada a TLR. Esta autofagia asociada a TLR es regulada rio debajo de la señalización de la integrina αv. Por otra parte, la señalización prolongada vía TLRs puede disminuir la capacidad de extracción y presentación de antígenos, aunque se desconoce el rol que la autofagia puede cumplir en este contexto. Con estos antecedentes, nos preguntamos cuál es el papel de la autofagia gatillada por la vía TLR en la extracción y presentación de antígenos en linfocitos B. Para ello, establecimos como objetivo general estudiar la modulación de la autofagia sobre la extracción y presentación de antígenos en el linfocito B y caracterizar el efecto de los ligandos TLR sobre la modulación de la autofagia en este proceso. Para ello, activamos linfocitos B con antígenos inmovilizados, para simular una sinapsis inmune, en presencia de estimuladores de la autofagia, TLR4 o TLR9 y evaluamos la capacidad de linfocitos B de extraer antígenos y de presentarlos a través de un co-coultivo con linfocitos T. También evaluamos la distribución de los lisosomas en la sinapsis inmune. Nuestros resultados muestran que la autofagia inducida por privación de nutrientes o Torin 1 disminuyen la extracción y presentación antigénica en linfocitos B. Por otra parte, encontramos que la estimulación con ligandos TLR por 24h induce autofagia en linfocitos B, la cual es independiente de la vía mTOR. Concordante con lo anterior, estos linfocitos estimulados 24 h con CpG ó LPS presentan una disminución en la extracción y presentación antigénica. Además, observamos que estos tratamientos gatillan una distribución periférica de los lisosomas en la membrana sináptica, y una menor llegada de éstos hacia la sinapsis inmune, lo que es concordante con la disminución en la extracción de antígenos, que depende de la secreción de lisosomas. Por último, nuestros resultados muestran que los linfocitos B carentes de la integrina αv, que inducen menor autofagia gatillada por ligandos TLRs, muestran una mayor extracción de antígenos respecto a células con esta integrina. Estos resultados sugieren que la autofagia inducida por ligandos TLR puede ser un mecanismo de control para disminuir la extracción antigénica en linfocitos B lo cual podría ser un mecanismo para limitar la expansión de linfocitos B autorreactivos. Los resultados obtenidos en esta tesis permiten comprender como se integran la autofagia durante la extracción y presentación de antígenos en el linfocito B, lo que repercute en su capacidad de colaborar con linfocitos T, y producir maduración de afinidad de su BCR. Este nuevo conocimiento tiene una auspiciosa proyección biomédica acerca de cómo modular la afinidad de los anticuerpos que esta célula produce.
- ItemRol de Exo70 en el tráfico polarizado de proteínas asociadas a la migración de linfocitos B(2023) Goles Varela, Nicolás Ignacio; Yuseff Sepúlveda, María Isabel; Pontificia Universidad Católica de Chile. Facultad de Ciencias BiológicasLos linfocitos B son células fundamentales del sistema inmune adaptativo, donde su desarrollo, maduración y activación están estrechamente ligados a su capacidad migratoria. La migración celular depende de una distribución asimétrica de moléculas de señalización, factores que promueven la remodelación del citoesqueleto de actina, como Arp2/3. Estudios de los mecanismos de tráfico intracelular asociados a migración han identificado que el exocisto, un complejo compuesto por 8 proteínas inicialmente descrito como regulador de la secreción y tráfico vesicular, tiene un importante rol en migración celular. En esta tesis evaluamos el rol de una proteína que forma parte del complejo exocisto, Exo70, y su relación con la migración de los linfocitos B, que hasta ahora no había sido explorado en estas células. Para abordar este estudio sometimos una línea celular de linfocitos B a ensayos funcionales de migración 2D y 3D donde encontramos que la migración de estas células depende de Exo70 mas no de otra subunidad del exocisto, Sec8. Adicionalmente evaluamos el ensamblaje del complejo y la ubicación subcelular de Exo70 en respuesta al estímulo migratorio. Por último, determinamos que Exo70 es fosforilado río abajo de la señal del receptor del estímulo migratorio y mostramos cómo esta promueve la interacción física de Exo70 con el complejo de ramificación de filamentos de actina Arp2/3. En esta tesis mostramos que Exo70 tiene un rol en la migración de linfocitos B, proceso fundamental para la búsqueda de antígenos, activación y posterior maduración de este tipo celular.
- ItemRol del proteosoma 26S en la formación y función de la sinapsis inmune de los linfocitos B.(2019) Ibáñez Vega, Jorge Andrés; Yuseff Sepúlveda, María Isabel; Pontificia Universidad Católica de Chile. Facultad de Ciencias BiológicasDurante la respuesta inmune, los linfocitos B deben reconocer, extraer y procesar antigenos, para posteriormente presentarlos a los linfocitos T, y alcanzar la estimulación necesaria para activarse. In vivo, los linfocitos B son principalmente activados por antigenos adosados a células presentadoras, mediante el reconocimiento por el receptor de linfocito B (BCR), que gatilla la formación de la sinapsis inmune. Esta estructura especializada concentra la señalización, tráfico vesicular, y remodelamiento del citoesqueleto, todos estrechamente coordinandos para promover la extracción y procesamiento de antigenos inmovilizados. La coordinación de estos procesos es atribuida a las proteínas de polaridad, tales como Cdc42, aPKC, y Par3, sin embargo, esta coordinación está lejos de estar completamente caracterizado. Interesantemente, el proteosoma a través de la degradación de proteínas modula la dinámica del citoesqueleto, señalización, y tráfico vesicular. Por lo tanto, nosotros nos preguntamos si el proteosoma puede coordinar la formación y función de la sinapsis inmune en linfocitos B. Esta tesis se enfoca en dilucidar si la actividad y localización del proteosoma modulan la formación y función de la sinapsis. Para este propósito, nosotros planteamos la siguiente hipótesis: “La formación y función de la sinapsis inmune en linfocitos B depende de la polarización y actividad del proteosoma”. Para abordar esta hipótesis, nos planteamos primero caracterizar si la actividad del proteosoma es importante para la función y formación de la sinapsis inmune, utilizando inhibidores farmacológicos. Luego, caracterizar la localización del proteosoma y el rol de su regulador Ecm29 en el control de su localización. Finalmente, identificar si la deslocalización del proteosoma afecta la formación y función de la sinapsis inmune.
- ItemRol del receptor de KDEL en la formación y función de la sinapsis inmune en Linfocitos B(2022) Fuentes Peña, Danitza Natalia; Yuseff Sepúlveda, María Isabel; Pontificia Universidad Católica de Chile. Facultad de Ciencias BiológicasLa interacción de los linfocitos B con los antígenos inmovilizados desencadena la formación de una sinapsis inmune (SI), caracterizada por un fenotipo polarizado que involucra un remodelamiento dinámico del citoesqueleto de actina, así como el reclutamiento del centrosoma y lisosomas al sitio de encuentro del antígeno. La participación y el procesamiento de antígenos en los linfocitos B aumentan la biosíntesis y el transporte de moléculas de MHC-II desde el retículo endoplásmico (RE) al aparato de Golgi. Datos de nuestro laboratorio señalan que el aparato de Golgi se localiza de cerca al IS tras la activación, sugiriendo que las proteínas de esta vía se concentran y liberan en este dominio de la SI. Una mayor demanda de la vía secretora genera un desequilibrio entre el RE y el Golgi, el cual es resuelto por el receptor de KDEL (KDELR), que permite la recuperación de proteínas del Golgi al RE. El tráfico del KDELR está asociado a la señalización rio abajo de quinasas de la familia Src, que además activan proteínas como Arp2/3 para promover la polimerización de actina. Las mutaciones en KDELR generan linfopenia y alteran el desarrollo de las células B y la activación de las células T, lo que sugiere que KDELR podría regular la formación y función del IS en las células B para promover su activación eficiente. Para probar esta hipótesis, proponemos estudiar el papel del KDELR en la remodelación del citoesqueleto de actina, la captura de antígenos, su procesamiento y presentación por los linfocitos B. Nuestros resultados muestran que tras la activación de las células B, el KDELR cambia su localización del Golgi al ER. Los linfocito B silenciados para el KDELR o que expresan una mutación del receptor muestran una remodelación citoesquelética de actina alterada en el IS, como se destaca por los defectos en su capacidad de estiramiento de membrana en respuesta al antígeno inmovilizado. Además, estas células muestran defectos en la polarización de lisosomas al IS, lo que conduce a una extracción y presentación deficiente de antígenos inmovilizados. En conclusión, KDELR controla la formación de SI regulando el remodelamiento y estiramiento de la membrana sináptica dependiente del citoesqueleto de actina, promoviendo el reclutamiento estable de lisosomas para facilitar la extracción del antígeno. Nuestros resultados destacan una novedoso mecanismo celular sobre cómo los cambios en la vía secretora se acoplan a la formación de SI durante la activación de los linfocitos B.
- ItemSpatiotemporal control of microtubule acetylation by mechanical cues regulates lysosome dynamics at the immune synapse of B cells to promote antigen presentation(2023) Del Valle Batalla, Felipe Andres; Riobo Cavada, Isidora Teresa De Jesus; Hernández Pérez, Sara; Mattila, Pieta K.; Yuseff Sepúlveda, María IsabelThe capacity of B cells to extract immobilized antigens through the formation of an immune synapse can be tuned by the physical characteristics of the surface where antigens are encountered. However, the underlying mechanisms that couple mechanosensing by B cells to antigen extraction and processing remain poorly understood.We show that B cells activated by antigens associated with stiffer substrates exhibit enhanced spreading responses and higher tubulin acetylation at the center of the immune synapse, where less motile lysosomes preferentially localize. This process is coupled to the translocation of the microtubule acetylase, ATAT1 to the cytoplasm of B cells, which occurs as a mechano-response during BCR stimulation. Accordingly, B cells silenced for ATAT1 are unable to stabilize lysosomes at the synaptic interface and display a lower capacity to extract and present immobilized antigens to T cells.Overall, these findings highlight how BCR-dependent mechano-responses trigger microtubule network modifications to precisely orchestrate lysosome positioning to promote antigen extraction and presentation in B cells
- ItemStudying Organelle Dynamics in B Cells During Immune Synapse Formation(2019) Ibáñez Vega, Jorge Andrés; Fuentes Peña, Danitza Natalia; Lagos Orellana, Jonathan Alexander; Cancino, Juan; Yuseff Sepúlveda, María Isabel
- ItemThe exocyst controls lysosome secretion and antigen extraction at the immune synapse of B cells(2019) Sáez, J. J.; Díaz Muñoz, Jheimmy Maríana; Ibáñez, J.; Bozo, J. P.| Reyes, F. C.; Alamo, M.; Gobert, F. X.; Obino, D.; Bono, M. R.; Lennon Dumenil, A. M.; Yeaman, C.; Yuseff Sepúlveda, María Isabel
- ItemTuning B cell responses to antigens by cell polarity and membrane trafficking(2018) Del Valle Batalla, Felipe; Lennon-Dumenil, Ana-Maria; Yuseff Sepúlveda, María Isabel
- ItemVamp-7–dependent secretion at the immune synapse regulates antigen extraction and presentation in B-lymphocytes(2017) Obinoa, Dorian; Diaz, Jheimmy; Sáez, Juan José; Ibañez Vega, Jorge; Sáez, Pablo J.; Alamo, Martina; Lankar, Danielle; Yuseff Sepúlveda, María Isabel