Determinación del crosstalk estructural entre los receptores de membrana 5-HT3a y P2X4 mediante microscopía de fuerza atómica.
| dc.contributor.advisor | Barrera Rojas, Nelson Patricio | |
| dc.contributor.author | Soto Sepúlveda, Paola Andrea | |
| dc.contributor.other | Pontificia Universidad Católica de Chile. Facultad de Ciencias Biológicas | |
| dc.date.accessioned | 2020-01-13T15:45:04Z | |
| dc.date.available | 2020-01-13T15:45:04Z | |
| dc.date.issued | 2020 | |
| dc.description | Tesis (Doctor en Ciencias Biológicas con mención en Ciencias Fisiológicas)--Pontificia Universidad Católica de Chile, 2020 | |
| dc.description.abstract | Los receptores ionotrópicos 5-HT3 y P2X representan dos tipos diferentes de canales iónicos activados por ligando, tanto estructural como funcionalmente. Desde el punto de vista fisiológico, cabe señalar que ambos receptores se expresan en el sistema nervioso central y periférico, pero es en el sistema nervioso central donde la participación de ambos receptores es importante, ya que participan en una serie de patologías como enfermedades neurodegenerativas y dolor neuropático. Aunque se ha demostrado el crosstalk funcional entre receptores ionotrópicos; aún se desconoce cómo los receptores 5-HT3a pueden interactuar directamente con los receptores P2X, específicamente con P2X4 y si esto depende de la presencia de agonistas como ATP. Se transfectó las células tsA 201 con pDNA de los receptores 5-HT3a y P2X4, marcados con los tags Myc/His-6 y HA respectivamente. La presencia del complejo 5-HT3a-P2X4 se analizó por inmunofluorescencia y western blot. Se obtuvo imágenes topográficas de los complejos 5- HT3a-P2X4 por microscopía de fuerza atómica (AFM) para determinar su estequiometría. Se observó una distribución de partículas polidispersa que sugiere dos poblaciones, una de ellas, la de menor volumen molecular sugiere la presencia de proteínas aisladas, en cambio la población de mayor volumen molecular sugiere la presencia de un complejo de proteínas con una estequiometría 1:1, cuya abundancia aumenta en presencia de ATP. Se determinó que la activación de P2X4 mediante ATP aumenta el nivel de calcio intracelular que es inhibido por el receptor 5-HT3a. Pre-incubación con PPADS, antagonista del receptor P2X4, inhibe el aumento de calcio del receptor P2X4 cuando está aislado o formando complejo. Mediante AFM de alta velocidad (HS-AFM) se observó en tiempo real la interacción física, probablemente entre los receptores 5-HT3a y P2X4 insertos en liposomas. Estos hallazgos proporcionan información sobre la arquitectura molecular del complejo de receptores 5-HT3a-P2X4 y nuevos antecedentes biofísicos sobre la regulación del crosstalk estructural entre receptores ionotrópicos.Los receptores ionotrópicos 5-HT3 y P2X representan dos tipos diferentes de canales iónicos activados por ligando, tanto estructural como funcionalmente. Desde el punto de vista fisiológico, cabe señalar que ambos receptores se expresan en el sistema nervioso central y periférico, pero es en el sistema nervioso central donde la participación de ambos receptores es importante, ya que participan en una serie de patologías como enfermedades neurodegenerativas y dolor neuropático. Aunque se ha demostrado el crosstalk funcional entre receptores ionotrópicos; aún se desconoce cómo los receptores 5-HT3a pueden interactuar directamente con los receptores P2X, específicamente con P2X4 y si esto depende de la presencia de agonistas como ATP. Se transfectó las células tsA 201 con pDNA de los receptores 5-HT3a y P2X4, marcados con los tags Myc/His-6 y HA respectivamente. La presencia del complejo 5-HT3a-P2X4 se analizó por inmunofluorescencia y western blot. Se obtuvo imágenes topográficas de los complejos 5- HT3a-P2X4 por microscopía de fuerza atómica (AFM) para determinar su estequiometría. Se observó una distribución de partículas polidispersa que sugiere dos poblaciones, una de ellas, la de menor volumen molecular sugiere la presencia de proteínas aisladas, en cambio la población de mayor volumen molecular sugiere la presencia de un complejo de proteínas con una estequiometría 1:1, cuya abundancia aumenta en presencia de ATP. Se determinó que la activación de P2X4 mediante ATP aumenta el nivel de calcio intracelular que es inhibido por el receptor 5-HT3a. Pre-incubación con PPADS, antagonista del receptor P2X4, inhibe el aumento de calcio del receptor P2X4 cuando está aislado o formando complejo. Mediante AFM de alta velocidad (HS-AFM) se observó en tiempo real la interacción física, probablemente entre los receptores 5-HT3a y P2X4 insertos en liposomas. Estos hallazgos proporcionan información sobre la arquitectura molecular del complejo de receptores 5-HT3a-P2X4 y nuevos antecedentes biofísicos sobre la regulación del crosstalk estructural entre receptores ionotrópicos.Los receptores ionotrópicos 5-HT3 y P2X representan dos tipos diferentes de canales iónicos activados por ligando, tanto estructural como funcionalmente. Desde el punto de vista fisiológico, cabe señalar que ambos receptores se expresan en el sistema nervioso central y periférico, pero es en el sistema nervioso central donde la participación de ambos receptores es importante, ya que participan en una serie de patologías como enfermedades neurodegenerativas y dolor neuropático. Aunque se ha demostrado el crosstalk funcional entre receptores ionotrópicos; aún se desconoce cómo los receptores 5-HT3a pueden interactuar directamente con los receptores P2X, específicamente con P2X4 y si esto depende de la presencia de agonistas como ATP. Se transfectó las células tsA 201 con pDNA de los receptores 5-HT3a y P2X4, marcados con los tags Myc/His-6 y HA respectivamente. La presencia del complejo 5-HT3a-P2X4 se analizó por inmunofluorescencia y western blot. Se obtuvo imágenes topográficas de los complejos 5- HT3a-P2X4 por microscopía de fuerza atómica (AFM) para determinar su estequiometría. Se observó una distribución de partículas polidispersa que sugiere dos poblaciones, una de ellas, la de menor volumen molecular sugiere la presencia de proteínas aisladas, en cambio la población de mayor volumen molecular sugiere la presencia de un complejo de proteínas con una estequiometría 1:1, cuya abundancia aumenta en presencia de ATP. Se determinó que la activación de P2X4 mediante ATP aumenta el nivel de calcio intracelular que es inhibido por el receptor 5-HT3a. Pre-incubación con PPADS, antagonista del receptor P2X4, inhibe el aumento de calcio del receptor P2X4 cuando está aislado o formando complejo. Mediante AFM de alta velocidad (HS-AFM) se observó en tiempo real la interacción física, probablemente entre los receptores 5-HT3a y P2X4 insertos en liposomas. Estos hallazgos proporcionan información sobre la arquitectura molecular del complejo de receptores 5-HT3a-P2X4 y nuevos antecedentes biofísicos sobre la regulación del crosstalk estructural entre receptores ionotrópicos.Los receptores ionotrópicos 5-HT3 y P2X representan dos tipos diferentes de canales iónicos activados por ligando, tanto estructural como funcionalmente. Desde el punto de vista fisiológico, cabe señalar que ambos receptores se expresan en el sistema nervioso central y periférico, pero es en el sistema nervioso central donde la participación de ambos receptores es importante, ya que participan en una serie de patologías como enfermedades neurodegenerativas y dolor neuropático. Aunque se ha demostrado el crosstalk funcional entre receptores ionotrópicos; aún se desconoce cómo los receptores 5-HT3a pueden interactuar directamente con los receptores P2X, específicamente con P2X4 y si esto depende de la presencia de agonistas como ATP. Se transfectó las células tsA 201 con pDNA de los receptores 5-HT3a y P2X4, marcados con los tags Myc/His-6 y HA respectivamente. La presencia del complejo 5-HT3a-P2X4 se analizó por inmunofluorescencia y western blot. Se obtuvo imágenes topográficas de los complejos 5- HT3a-P2X4 por microscopía de fuerza atómica (AFM) para determinar su estequiometría. Se observó una distribución de partículas polidispersa que sugiere dos poblaciones, una de ellas, la de menor volumen molecular sugiere la presencia de proteínas aisladas, en cambio la población de mayor volumen molecular sugiere la presencia de un complejo de proteínas con una estequiometría 1:1, cuya abundancia aumenta en presencia de ATP. Se determinó que la activación de P2X4 mediante ATP aumenta el nivel de calcio intracelular que es inhibido por el receptor 5-HT3a. Pre-incubación con PPADS, antagonista del receptor P2X4, inhibe el aumento de calcio del receptor P2X4 cuando está aislado o formando complejo. Mediante AFM de alta velocidad (HS-AFM) se observó en tiempo real la interacción física, probablemente entre los receptores 5-HT3a y P2X4 insertos en liposomas. Estos hallazgos proporcionan información sobre la arquitectura molecular del complejo de receptores 5-HT3a-P2X4 y nuevos antecedentes biofísicos sobre la regulación del crosstalk estructural entre receptores ionotrópicos.Los receptores ionotrópicos 5-HT3 y P2X representan dos tipos diferentes de canales iónicos activados por ligando, tanto estructural como funcionalmente. Desde el punto de vista fisiológico, cabe señalar que ambos receptores se expresan en el sistema nervioso central y periférico, pero es en el sistema nervioso central donde la participación de ambos receptores es importante, ya que participan en una serie de patologías como enfermedades neurodegenerativas y dolor neuropático. Aunque se ha demostrado el crosstalk funcional entre receptores ionotrópicos; aún se desconoce cómo los receptores 5-HT3a pueden interactuar directamente con los receptores P2X, específicamente con P2X4 y si esto depende de la presencia de agonistas como ATP. Se transfectó las células tsA 201 con pDNA de los receptores 5-HT3a y P2X4, marcados con los tags Myc/His-6 y HA respectivamente. La presencia del complejo 5-HT3a-P2X4 se analizó por inmunofluorescencia y western blot. Se obtuvo imágenes topográficas de los complejos 5- HT3a-P2X4 por microscopía de fuerza atómica (AFM) para determinar su estequiometría. Se observó una distribución de partículas polidispersa que sugiere dos poblaciones, una de ellas, la de menor volumen molecular sugiere la presencia de proteínas aisladas, en cambio la población de mayor volumen molecular sugiere la presencia de un complejo de proteínas con una estequiometría 1:1, cuya abundancia aumenta en presencia de ATP. Se determinó que la activación de P2X4 mediante ATP aumenta el nivel de calcio intracelular que es inhibido por el receptor 5-HT3a. Pre-incubación con PPADS, antagonista del receptor P2X4, inhibe el aumento de calcio del receptor P2X4 cuando está aislado o formando complejo. Mediante AFM de alta velocidad (HS-AFM) se observó en tiempo real la interacción física, probablemente entre los receptores 5-HT3a y P2X4 insertos en liposomas. Estos hallazgos proporcionan información sobre la arquitectura molecular del complejo de receptores 5-HT3a-P2X4 y nuevos antecedentes biofísicos sobre la regulación del crosstalk estructural entre receptores ionotrópicos.Los receptores ionotrópicos 5-HT3 y P2X representan dos tipos diferentes de canales iónicos activados por ligando, tanto estructural como funcionalmente. Desde el punto de vista fisiológico, cabe señalar que ambos receptores se expresan en el sistema nervioso central y periférico, pero es en el sistema nervioso central donde la participación de ambos receptores es importante, ya que participan en una serie de patologías como enfermedades neurodegenerativas y dolor neuropático. Aunque se ha demostrado el crosstalk funcional entre receptores ionotrópicos; aún se desconoce cómo los receptores 5-HT3a pueden interactuar directamente con los receptores P2X, específicamente con P2X4 y si esto depende de la presencia de agonistas como ATP. Se transfectó las células tsA 201 con pDNA de los receptores 5-HT3a y P2X4, marcados con los tags Myc/His-6 y HA respectivamente. La presencia del complejo 5-HT3a-P2X4 se analizó por inmunofluorescencia y western blot. Se obtuvo imágenes topográficas de los complejos 5- HT3a-P2X4 por microscopía de fuerza atómica (AFM) para determinar su estequiometría. Se observó una distribución de partículas polidispersa que sugiere dos poblaciones, una de ellas, la de menor volumen molecular sugiere la presencia de proteínas aisladas, en cambio la población de mayor volumen molecular sugiere la presencia de un complejo de proteínas con una estequiometría 1:1, cuya abundancia aumenta en presencia de ATP. Se determinó que la activación de P2X4 mediante ATP aumenta el nivel de calcio intracelular que es inhibido por el receptor 5-HT3a. Pre-incubación con PPADS, antagonista del receptor P2X4, inhibe el aumento de calcio del receptor P2X4 cuando está aislado o formando complejo. Mediante AFM de alta velocidad (HS-AFM) se observó en tiempo real la interacción física, probablemente entre los receptores 5-HT3a y P2X4 insertos en liposomas. Estos hallazgos proporcionan información sobre la arquitectura molecular del complejo de receptores 5-HT3a-P2X4 y nuevos antecedentes biofísicos sobre la regulación del crosstalk estructural entre receptores ionotrópicos.Los receptores ionotrópicos 5-HT3 y P2X representan dos tipos diferentes de canales iónicos activados por ligando, tanto estructural como funcionalmente. Desde el punto de vista fisiológico, cabe señalar que ambos receptores se expresan en el sistema nervioso central y periférico, pero es en el sistema nervioso central donde la participación de ambos receptores es importante, ya que participan en una serie de patologías como enfermedades neurodegenerativas y dolor neuropático. Aunque se ha demostrado el crosstalk funcional entre receptores ionotrópicos; aún se desconoce cómo los receptores 5-HT3a pueden interactuar directamente con los receptores P2X, específicamente con P2X4 y si esto depende de la presencia de agonistas como ATP. Se transfectó las células tsA 201 con pDNA de los receptores 5-HT3a y P2X4, marcados con los tags Myc/His-6 y HA respectivamente. La presencia del complejo 5-HT3a-P2X4 se analizó por inmunofluorescencia y western blot. Se obtuvo imágenes topográficas de los complejos 5- HT3a-P2X4 por microscopía de fuerza atómica (AFM) para determinar su estequiometría. Se observó una distribución de partículas polidispersa que sugiere dos poblaciones, una de ellas, la de menor volumen molecular sugiere la presencia de proteínas aisladas, en cambio la población de mayor volumen molecular sugiere la presencia de un complejo de proteínas con una estequiometría 1:1, cuya abundancia aumenta en presencia de ATP. Se determinó que la activación de P2X4 mediante ATP aumenta el nivel de calcio intracelular que es inhibido por el receptor 5-HT3a. Pre-incubación con PPADS, antagonista del receptor P2X4, inhibe el aumento de calcio del receptor P2X4 cuando está aislado o formando complejo. Mediante AFM de alta velocidad (HS-AFM) se observó en tiempo real la interacción física, probablemente entre los receptores 5-HT3a y P2X4 insertos en liposomas. Estos hallazgos proporcionan información sobre la arquitectura molecular del complejo de receptores 5-HT3a-P2X4 y nuevos antecedentes biofísicos sobre la regulación del crosstalk estructural entre receptores ionotrópicos. | |
| dc.format.extent | ix, 56 páginas | |
| dc.identifier.doi | 10.7764/tesisUC/BIO/27431 | |
| dc.identifier.uri | https://doi.org/10.7764/tesisUC/BIO/27431 | |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.uc.cl/handle/11534/27431 | |
| dc.language.iso | es | |
| dc.nota.acceso | Contenido completo | |
| dc.rights | acceso abierto | |
| dc.subject.ddc | 572.696 | |
| dc.subject.dewey | Biología | es_ES |
| dc.subject.other | Receptores purinérgicos P2X4 | es_ES |
| dc.subject.other | Canales iónicos - Fisiología | es_ES |
| dc.subject.other | Sinapsis - Fisiología | es_ES |
| dc.title | Determinación del crosstalk estructural entre los receptores de membrana 5-HT3a y P2X4 mediante microscopía de fuerza atómica. | es_ES |
| dc.type | tesis doctoral | |
| sipa.codpersvinculados | 156003 | |
| sipa.codpersvinculados | 4086 |