The humoral immune response induced by two recombinant bacillus Calmette-Guérin vaccines promotes viral clearance against the human respiratory sincytial virus and the human metapneumovirus in mice
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Date
2018
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Abstract
El virus respiratorio sincicial humano (VRSh) y metapneumovirus humano (MPVh) son dos de los principales agentes etiológicos con mayor incidencia asociada a enfermedades respiratorias a nivel mundial, la incidencia de estos virus se ve incrementada durante las estaciones de otoño e invierno siendo principalmente VRSh el mayor causante de hospitalizaciones. Los principales reservorios de infección son recién nacidos, niños menores a dos años, personas inmunocomprometidas y ancianos. Los cuadros clínicos característicos asociados a la infección por estos virus son bronquitis y pneumonía. Sin embargo, se ha determinado que ambos virus podrían ser causantes de la aparición temprana de asma en niños. Además, se ha descrito que MPVh podría influenciar la aparición de enfermedades pulmonares obstructivas crónicas (EPOC). La patología asociada a la infección de estos virus es principalmente desencadenada por una respuesta inflamatoria caracterizada por un incremento en la secreción de citoquinas IL-4, IL-5, IL-8 acompañado de la producción de mucus en el epitelio pulmonar y a una contracción de las vías aéreas. Sumado a esto, la infección de ambos virus promueve a que la respuesta antiviral generada por la secreción de IFN de tipo I sea inhibida, esto, junto con una mala activación de los Linfocitos T, promueve un estado de anergia de estas células por parte de la infección mediada por VRSh desencadenado por la acumulación de proteína N del virus en la zona inducción de la sinapsis inmunológica, mientras que MPVh promueve que exista una baja activación de estas células asociado posiblemente a factores solubles, sin embargo, esto aún no ha sido comprobado. En la actualidad, no existen vacunas licenciadas para ninguno de estos virus. Sin embargo, algunos prototipos están siendo estudiados ya sea, en uso con animales como en pruebas en humanos. En nuestro laboratorio se generaron cepas recombinantes de la Mycobacteria Bacillus Calmette-Guérin (BCG) que expresan la proteína N-VRSh (rBCG-N) o la proteína P-MPVh (rBCG-P). Ambas vacunas fueron evaluadas en modelo animal encontrándose una respuesta inmune protectora a nivel celular mediado principalmente por la actividad de Linfocitos T. En este trabajo de tesis, se evaluó la respuesta inmune humoral inducida por estas vacunas y se logró determinar que ambas vacunas fueron capaces de promover la eliminación del agente viral, disminuyendo la inflamación pulmonar y parámetros asociados a infección. Además, se determinó que los anticuerpos secretados en respuesta a las vacunas tenían un perfil neutralizante y protector en modelo in vivo. Por otro lado, basados en la buena respuesta obtenida se decidió evaluar dos clones de la vacuna rBCG-P en condiciones de proceso de manufactura GMP y se evaluó el rol protector utilizando una dosis de inmunización menor a la usada anteriormente. Los resultados obtenidos permitieron concluir que la cepa rBCG-P clone 12 fue capaz de disminuir la inflamación pulmonar acompañada de una eficiente respuesta inmune humoral y celular vinculada a la activación de células T CD4+, CD8+, linfocitos B y una activa secreción de anticuerpos IgA e IgG. Finalmente, se determinó que la transferencia de anticuerpos y/o células provenientes de animales vacunados con esta cepa recombinante mostraron una eficiente eliminación del virus promoviéndose así una respuesta inmune protectora.
Description
Tesis (Doctor en Ciencias con mención en Genética Molecular y Microbiología)--Pontificia Universidad Católica de Chile, 2018