MicroRNAs que regulan la expresión de los factores de transcripción SNAIL, SLUG, ZEB1 Y TWIST reprimen la invasión, la migración y la proliferación celular en cáncer de mama.
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Date
2020
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Abstract
El cáncer de mama se clasifica en distintos subtipos tumorales, cada uno de los cuales
presenta diferentes características moleculares y clínicas, en especial en relación a la
aparición de una metástasis y la sobrevida general. Por su parte, la metástasis corresponde a
la primera causa de muerte por cáncer, siendo uno de los temas de mayor interés hoy para la
investigación en cáncer. Una de las primeras evidencias de metástasis en cáncer de mama es
la presencia de tumores en los nodos linfáticos cercanos al tumor, cuya detección es
importante, ya que determina el tratamiento al cual será sometida la paciente. A nivel
molecular, la metástasis inicia con un cambio fenotípico de las células, denominado
transición epitelio-mesénquima, el cual es inducido por los factores de transcripción SNAIL,
SLUG, ZEB1 y TWIST. Debido a que estos cambios en la célula deben ser plásticos y
reversibles, las alteraciones epigenéticas se han visto involucradas en la transición epiteliomesénquima. Los microRNAs tienen la habilidad de regular varios genes involucrados en el
desarrollo del cáncer y en la metástasis, por lo tanto, han surgido como marcadores
moleculares y posibles blancos de terapia. En esta tesis se propuso identificar microRNAs,
cuya expresión se encuentra alterada en cáncer de mama, y que participan en el desarrollo de
la metástasis a través de la regulación de SNAIL, SLUG, ZEB1 y TWIST. Para este
propósito, se realizó inmunohistoquímica en 101 tumores de mama con el fin de determinar
la expresión de estos cuatro factores de transcripción. Esta información fue combinada con
datos de microarreglos de expresión de microRNAs previamente realizados en este grupo de
tumores. De esta forma, se identificaron 94 microRNAs que se encuentran sub-expresados
en tumores con expresión de SNAIL, SLUG, ZEB1 y TWIST. Mediante análisis in silico se
encontró que 33 de estos microRNAs se encuentran predichos como reguladores de la expresión de estos factores de transcripción, y seis fueron seleccionados para su validación:
miR-196a, miR-202, miR-210, miR-22, miR-331 y miR-34b. Mediante ensayos de gen
reportero luciferasa se confirmó la regulación de estos microRNAs sobre los blancos
predichos in silico, excepto para miR-34b que no mostró efecto. Además, estos microRNAs
son capaces de disminuir la migración, la invasión y/o la proliferación de la línea celular
MDA-MB-231, demostrando ser microRNAs anti-metastásicos. Dos de los microRNAs
analizados, miR-196a y miR-22, disminuyen los niveles endógenos de ZEB1 en el modelo
celular utilizado, confirmando por primera vez a este factor de transcripción como un blanco
de regulación de estos dos microRNAs en cáncer. Adicionalmente, demostramos mediante
distintas aproximaciones que miR-196a, miR-202 y miR-30a regulan los niveles de CCR7,
receptor de quimioquinas involucrado en la migración específica de las células hacia los
nodos linfáticos. Nuestros resultados sugieren que la pérdida de expresión de los microRNAs
miR-196a, miR-202, miR-210, miR-22, miR-331 y miR-34b en cáncer de mama contribuye
a la formación de metástasis en los linfonodos, mediante el aumento de las características
metastásicas de las células tumorales y/o de su migración dirigida hacia los nodos linfáticos
cercanos al tumor.
Description
Tesis (Doctor en Ciencias Biológicas,con mención en Biología Celular y Molecular)--Pontificia Universidad Católica de Chile, 2020