Disfunción vascular inducida por la liberación de CGRP desde los nervios sensoriales perivasculares.
| dc.contributor.advisor | Figueroa, Xavier | |
| dc.contributor.author | Gaete Pauchard, Pablo Simón | |
| dc.contributor.other | Pontificia Universidad Católica de Chile. Facultad de Ciencias Biológicas | |
| dc.date.accessioned | 2016-05-13T19:27:15Z | |
| dc.date.available | 2016-05-13T19:27:15Z | |
| dc.date.issued | 2015 | |
| dc.description | Tesis (Doctor en Ciencias Biológicas, mención en Ciencias Fisiológicas)--Pontificia Universidad Católica de Chile, 2015 | |
| dc.description.abstract | La regulación de la presión arterial y de la distribución del flujo sanguíneo depende del control del grado de contracción del músculo liso (i.e. tono vasomotor) que recubre las arterias de resistencia. Además del músculo liso, la pared de estos vasos está compuesta por una capa de células endoteliales, las cuales controlan el tono vasomotor mediante la liberación de agentes vasodilatadores, principalmente, el óxido nítrico (NO) y el factor hiperpolarizante derivado del endotelio (EDHF). Las células de la pared vascular están conectadas entre sí por canales intercelulares formados por conexinas, los cuales transmiten el NO y el EDHF a las células musculares lisas adyacentes y permiten la coordinación de la función vascular. Las conexinas también forman hemicanales, los cuales conectan el compartimiento intracelular con el espacio extracelular. La panexina-1 (Panx-1) forma canales estructuralmente similares a los hemicanales formados por las conexinas. Interesantemente, la activación de ambos, los hemicanales formados por conexinas o los canales de Panx-1, ha sido ampliamente asociada a procesos inflamatorios y a disfunción celular. Las arterias de resistencia están inervadas por fibras sensoriales sensibles a capsaicina que liberan el péptido relacionado al gen de la calcitonina (CGRP) durante condiciones inflamatorias. Notablemente la inflamación conduce a la reducción de la vasodilatación dependiente del NO y del EDHF; no obstante, los mecanismos que median este fenómeno se desconocen. Basado en estos antecedentes, la hipótesis de este trabajo es que el CGRP induce la activación de los canales de Panx-1 en el endotelio vascular, lo cual conduce a la pérdida de la señalización del NO y a la inhibición del acoplamiento intercelular mediado por uniones comunicantes. | |
| dc.description.abstract | Los objetivos generales son: 1) determinar si la liberación de CGRP desde los terminales sensoriales perivasculares regula la vasodilatación dependiente de NO en las arterias de resistencia; 2) determinar si los canales de panexinas y/o los hemicanales formados por conexinas participan en la disfunción endotelial inducida por CGRP; 3) dilucidar el mecanismo de activación de los canales de panexinas y/o de los hemicanales formados por conexinas inducido por CGRP; 4) analizar si la activación de los nervios sensoriales perivasculares regula la comunicación intercelular en las arterias de resistencia. Para abordar estos objetivos, se utilizó la red arterial mesentérica de rata, aislada y perfundida. En esta preparación, se indujo la liberación de CGRP desde los nervios sensoriales perivasculares mediante la perfusión de capsaicina (1 \03BCM), durante 20 min. Antes y/o después de este tratamiento, se evaluó la vasodilatación inducida por acetilicolina (ACh, 0,01 \2212 10 \03BCM), un vasodilatador dependiente del endotelio; se determinó la producción de NO; se cuantificó la expresión de proteínas mediante Western blot; y se analizó, mediante captación de etidio o amarillo de lucifer, los cambios en la permeabilidad de la membrana a través de canales tales como los constituidos por panexinas o los hemicanales formados por conexinas. Finalmente, se analizó la comunicación intercelular mediante un ensayo de acoplamiento a colorante. El tratamiento con capsaicina no afectó la magnitud de la respuesta vasodilatadora inducida por ACh. | |
| dc.description.abstract | No obstante, en los mesenterios estimulados con capsaicina, la vasodilatación dependiente de NO fue inhibida de manera progresiva a lo largo del tiempo, mientras que una respuesta vasodilatadora sensible a indometacina compensó la pérdida del componente de NO. Además, el tratamiento con capsaicina incrementó la producción de superóxido, redujo los niveles basales de la fosforilación de la eNOS en serina 1177 (PeNOSSer1177) e inhibió la producción de NO inducida por ACh. El bloqueo del receptor CGRP- 1 con CGRP8-37 previno la inhibición de la vasodilatación dependiente de NO y la reducción de los niveles de P-eNOSSer1177. La estimulación con capsaicina o CGRP indujo un aumento en la captación de etidio en las arterias mesentéricas, lo cual no fue prevenido por lantano (inhibidor de hemicanales de conexinas) ni PPADS (antagonista de receptores purinérgicos P2), pero sí por probenecid (inhibidor de los canales de Panx-1), CGRP8-37, KT-5720 (inhibidor de la PKA) y L-NA (bloqueador de la producción de NO). Una hora después de la estimulación con capsaicina o CGRP, se detectó una captación similar de etidio la cual fue prevenida cuando la estimulación se hizo en presencia de CGRP8-37 o probenecid. | |
| dc.description.abstract | La captación de etidio observada 1 h después del tratamiento con capsaicina fue inhibida parcialmente por ambos, probenecid o lantano. La captación del colorante amarillo de lucifer inducida por capsaicina o CGRP se detectó principalmente en células orientadas de forma paralela con respecto al eje longitudinal del vaso. El bloqueo de los canales de Panx-1 con probenecid o 10panx, previno la inhibición de la vasodilatación dependiente de NO, la reducción de los niveles de P-eNOSSer1177 y la inhibición de la producción de NO causada por capsaicina. Además, el tratamiento con capsaicina o CGRP inhibió la difusión del etidio mediada por uniones comunicantes en la pared vascular. Los resultados de este trabajo sugieren que la activación de los nervios sensoriales perivasculares conduce a la liberación de CGRP desde los terminales sensoriales y a la activación de los receptores CGRP-1. La activación de los receptores CGRP-1 conlleva a la activación prolongada de los canales de Panx-1 en el endotelio vascular mediante la vía PKA-NO. La apertura de los canales de Panx- 1 conduce a la inhibición de la producción del NO. Adicionalmente, la activación de los nervios sensoriales perivasculares sensibles a capsaicina, a través de la liberación de CGRP, también conduce a la inhibición del acoplamiento intercelular a través de uniones comunicantes. Estos resultados apuntan a los nervios sensoriales perivasculares, el receptor de CGRP-1 y los canales de Panx-1 como potenciales blancos terapéuticos en estados patológicos que conlleven a la activación de las fibras sensoriales y a disfunción endotelial como por ejemplo, la inflamación. | |
| dc.format.extent | xxvii, 212, [10] páginas | |
| dc.identifier.doi | 10.7764/tesisUC/BIO/14977 | |
| dc.identifier.uri | https://doi.org/10.7764/tesisUC/BIO/14977 | |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.uc.cl/handle/11534/14977 | |
| dc.language.iso | es | |
| dc.nota.acceso | Contenido completo | |
| dc.rights | acceso abierto | |
| dc.subject.ddc | 610 | |
| dc.subject.dewey | Medicina y salud | es_ES |
| dc.subject.other | Péptido relacionado con gel de calcitonina. | es_ES |
| dc.subject.other | Músculo liso vascular - Fisiología. | es_ES |
| dc.subject.other | Calcitonina - Fisiología. | es_ES |
| dc.title | Disfunción vascular inducida por la liberación de CGRP desde los nervios sensoriales perivasculares. | es_ES |
| dc.type | tesis doctoral | |
| sipa.codpersvinculados | 1437 |
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