3.02 Tesis doctorado

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Browsing 3.02 Tesis doctorado by Subject "612.463"

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    Renal exosomes and their role in primary aldosteronism: an in vitro and in vivo approach
    (2020) Barros Lamus, Eric Raúl; Carvajal Maldonado, Cristián Andrés; Pontificia Universidad Católica de Chile. Escuela de Medicina
    Los exosomas renales son liberados por las células epiteliales que delimitan la nefrona, transportan información biológica. Aunque es conocido que los exosomas modulan la señalización purinérgica en tejidos extra-renales, se desconoce si exosomas renales realizan este tipo de regulación. La señalización purinérgica es crucial para la fisiología y el transporte renal de sodio, principalmente debido a sus efectos sobre el canal epitelial de sodio (ENaC). El aldosteronismo primario (HAP) es una patología caracterizada por elevados niveles de aldosterona y aumento en la actividad del ENaC, que podría modificar los exosomas renales. Hipótesis: exosomas renales regulan procesos celulares relacionados con el transporte de sodio mediante la modulación de la señalización purinérgica y la expresión de ENaC en el epitelio renal, y su concentración, bioactividad y cargo se modifica en el HAP. Objetivo: estudiar exosomas renales como nuevos reguladores de la señalización purinérgica y el transporte de sodio en células epiteliales renales, y los efectos de altos niveles de aldosterona en la concentración, bioactividad y cargo proteico de exosomas en pacientes con HAP y en un modelo celular de aldosteronismo. Métodos: se aislaron exosomas de células del túbulo proximal (HK-2), colector (HCD), muestras de orina humana (n=32) mediante ultracentrifugación. Se determinó el efecto de exosomas HK-2 y HCD sobre el ATP extracelular y sobre la expresión del canal epitelial de sodio (ENaC) y otros genes purinérgicos mediante luminiscencia y qPCR respectivamente. El efecto de aldosterona sobre la concentración de exosomas de células HK-2 y HCD se evaluó mediante Nanotracking Analysis (NTA). El proteoma, concentración y bioactividad de exo-u de pacientes HAP se evaluó utilizando espectrometría, NTA y luminiscencia, respectivamente. Resultados: Exosomas de HK-2 aumentan (40%) y exosomas de HCD disminuyen (50%) el ATP extracelular en células HCD, los últimos mediante hidrólisis del ATP. Exosomas HK-2 disminuyen (30%) y exosomas de HCD aumentan (30%) la expresión de ENaC en HCD. Aldosterona aumenta la concentración de exosomas en HK-2 (63%) y HCD (87%). Solo exosomas HCD apicales hidrolizan. U-exo de pacientes HAP son mas pequeños (8%) y abundantes (70%) comparados con controles. ORM1 en u-exo de pacientes HAP destaca como potencial biomarcadores de HAP, los cuales además aumentan la expresión de ENaC en células HCD. Conclusión: exosomas luminales regulan procesos asociados al transporte de sodio modulando la señalización purinérgica y la expresión de ENaC en una forma dependiente del segmento que origina los exosomas. Aldosterona esta involucrada en la liberación de exosomas. En el HAP se modifican los efectos de u-exo sobre ENaC. La abundancia de ORM1 en u-exo destaca como potencial biomarcador de HAP.