Browsing by Author "Hill Machado, Charlotte Nicole"

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    A case-control study of a combination of single nucleotide polymorphisms and clinical parameters to predict clinically relevant toxicity associated with fluoropyrimidine and platinum-based chemotherapy in gastric cancer
    (2021) Cordova-Delgado, Miguel; Bravo Castillo, María Loreto; Cumsille, Elisa; Hill Machado, Charlotte Nicole; Pinto, Mauricio P.; Miquel P., Juan Francisco; Rodríguez-Fernández, María; Corvalán R., Alejandro; Garrido S., Marcelo; Owen, Gareth Ivor
    Background: Fluoropyrimidine plus platinum chemotherapy remains the standard first line treatment for gastric cancer (GC). Guidelines exist for the clinical interpretation of four DPYD genotypes related to severe fluoropyrimidine toxicity within European populations. However, the frequency of these single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the Latin American population is low (< 0.7%). No guidelines have been development for platinum. Herein, we present association between clinical factors and common SNPs in the development of grade 3–4 toxicity. Methods: Retrospectively, 224 clinical records of GC patient were screened, of which 93 patients were incorporated into the study. Eleven SNPs with minor allelic frequency above 5% in GSTP1, ERCC2, ERCC1, TP53, UMPS, SHMT1, MTHFR, ABCC2 and DPYD were assessed. Association between patient clinical characteristics and toxicity was estimated using logistic regression models and classification algorithms. Results; Reported grade ≤ 2 and 3–4 toxicities were 64.6% (61/93) and 34.4% (32/93) respectively. Selected DPYD SNPs were associated with higher toxicity (rs1801265; OR = 4.20; 95% CI = 1.70–10.95, p = 0.002), while others displayed a trend towards lower toxicity (rs1801159; OR = 0.45; 95% CI = 0.19–1.08; p = 0.071). Combination of paired SNPs demonstrated significant associations in DPYD (rs1801265), UMPS (rs1801019), ABCC2 (rs717620) and SHMT1 (rs1979277). Using multivariate logistic regression that combined age, sex, peri-operative chemotherapy, 5-FU regimen, the binary combination of the SNPs DPYD (rs1801265) + ABCC2 (rs717620), and DPYD (rs1801159) displayed the best predictive performance. A nomogram was constructed to assess the risk of developing overall toxicity. Conclusion: Pending further validation, this model could predict chemotherapy associated toxicity and improve GC patient quality of life.
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    Galectin-9 promotes an immune-suppresive microenvironment in gastric cancer
    (2021) Hill Machado, Charlotte Nicole; Owen, Gareth Ivor; Pontificia Universidad Católica de Chile. Facultad de Ciencias Biológicas
    Las inmunoterapias con anticuerpos bloqueadores de proteínas inmuno-reguladoras o ‘immune checkpoints’ han revolucionado el tratamiento del cáncer gástrico (GC), particularmente los anticuerpos contra el receptor PD-1. Sin embargo, la presencia de un microambiente inmunosupresor y la redundancia entre proteínas inmuno-reguladoras podría ser responsable por el alto porcentaje de pacientes que no presenta un beneficio clínico. Una proteína imuno-reguladora emergente es el receptor Tim-3, una proteína de membrana capaz de promover inmunosupresión. A pesar de que este receptor ha adquirido recientemente relevancia en el campo de la inmuno-oncología, la expresión y rol de su ligando Galectina-9 (Gal-9) en GC aún no han sido determinados. Se evaluó el patrón de expresión de Tim-3 y Gal-9 en el transcriptoma adenocarcinomas gástricos de la base de datos TCGA mediante análisis bioinformáticos (TIMER©, Cibersort y Xcell). Para evaluar el rol de Gal-9 en células de cáncer se transfectaron líneas celulares AGS y GES-1 y se evaluó el efecto de Gal-9 sobre su viabilidad, migración, invasión y expresión de proteínas inmuno-reguladoras. También se utilizó Gal-9 recombinante (rhGal-9) para tratar células endoteliales de cordón umbilical humanas (HUVEC) y evaluar su efecto sobre la capacidad angiogénica de estas células. Finalmente se evaluó el efecto de rhGal-9 sobre cultivos primarios de linfocitos T en presencia o ausencia de anticuerpos bloqueantes de los receptores inmuno-reguladoras PD-1 y Tim-3. Se evaluó la frecuencia de las poblaciones de células CD8+ disfuncionales y de células T reguladoras (Treg). Los análisis de la base de datos TCGA demostraron que los niveles de mRNA de Gal-9 y Tim-3 están aumentados en STAD en relación a tejido gástrico sano. Los niveles de Tim-3 también presentaron un incremento significativo en STAD invasivos. También se observó que Gal-9 y Tim-3 presentan una correlación con otras proteínas inmuno-reguladoras como PDL-1 (el ligando de PD-1), resultado que fue posteriormente confirmado por nuestros experimentos in vitro donde la transfección de Gal-9 aumentó la expresión de su receptor Tim-3 y de PDL-1 en células de GC. Consistente con el aumento de los niveles de Tim-3 en tumores avanzados, Gal-9 incrementó la migración e invasión de las células AGS y GES-1, así como también la migración y angiogénesis in vitro en HUVEC. También a través de análisis bioinformáticos observamos una fuerte correlación positiva entre los niveles de Gal-9 y la firma molecular de células CD8+ disfuncionales y Treg infiltrantes de tumores, sugiriendo que Gal-9 podría tener un rol en el aumento de la disfunción de células CD8+ y en la expansión de Treg en el tumor. A través de experimentos in vitro, observamos que tanto rhGal9 como células de cáncer transfectadas con Gal-9 aumentan la frecuencia de las poblaciones disfuncionales PD1+ Tim-3+ y PD1+ Tim-3+ LAG3+ , así como de la frecuencia de Treg de manera Tim-3 dependiente. Estos resultados sugieren una asociación entre la vía de Gal-9/Tim-3 y tumores más agresivos con un microambiente más inmunosupresor. Dado que la disfunción de células T ha sido asociada a la resistencia a inmunoterapia, evaluamos si es que Gal-9 pudiera ejercer efectos similares en presencia de un anticuerpo αPD1. Como era esperado, el αPD1 disminuyó las poblaciones disfuncionales, sin embargo no en presencia de rhGal-9. Esto indica que Gal-9 puede promover el fenotipo disfuncional a pesar del bloqueo de PD1, lo cual apoya el uso de estrategias combinatorias utilizando bloqueadores de PD1 y Tim-3 en la clínica. Debido a que Gal-9 es una proteína secretada y detectable en plasma, proponemos que sus niveles plasmáticos podrían servir como un biomarcador para la inmunoterapia combinada (αPD1 + αTim3). Más aún, un aumento en los niveles circulantes de Gal-9 en pacientes recibiendo la monoterapia con αPD1 podría indicar mayor probabilidad de resistencia adquirida y momento para iniciar la terapia combinada