Browsing by Author "Cortés Mora, Víctor Antonio"

Now showing 1 - 20 of 36
  • Thumbnail Image
    Item
  • No Thumbnail Available
    Item
    Absence of AGPAT2 impairs brown adipogenesis, increases IFN stimulated gene expression and alters mitochondrial morphology
    (2020) Tapia Ossa, Pablo José; Figueroa Toledo, Ana María; Eisner Sagüés, Verónica Raquel; González Hódar, Lila Alejandra; Robledo Plaza, Fermín Alberto; Agarwal, AK; Garg, A.; Cortés Mora, Víctor Antonio
  • No Thumbnail Available
    Item
    Advances in the physiological and pathological implications of cholesterol
    (2013) Cortés Mora, Víctor Antonio; Busso, Dolores; Mardones, Pablo; Maiz Gurruchaga, Manuel Alberto; Arteaga Ll., Antonio; Nervi, Flavio; Rigotti Rivera, Attilio
  • Thumbnail Image
    Item
    AGPAT2 deficiency impairs adipogenic differentiation in primary cultured preadipocytes in a non-autophagy or apoptosis dependent mechanism
    (2015) Fernandez Galilea, Marta; Tapia, Pablo; Cautivo Reyes, Kelly Margarita; Morselli, Eugenia; Cortés Mora, Víctor Antonio
  • Thumbnail Image
    Item
    AGPAT2 is essential for postnatal development and maintenance of white and brown adipose tissue
    (2016) Cautivo Reyes, Kelly Margarita; Lizama, Carlos O.; Tapia Ossa, Pablo José; Agarwal, Anil K.; Garg, Abhimanyu; Horton, Jay D.; Cortés Mora, Víctor Antonio
  • Thumbnail Image
    Item
    Asociación entre diabetes mellitus y patología cardiovascular en la población adulta de Chile : Estudio de la Encuesta Nacional de Salud 2009-2010
    (2014) Arteaga Ll., Antonio; Maiz, A.; Rigotti Rivera, Attilio; Cortés Mora, Víctor Antonio
  • Thumbnail Image
    Item
    Balance energético en ratones lipodistróficos con deleción del gen Agpat2 y su respuesta a la infusión de leptina
    (2022) Mejía Rivera, Luisa Fernanda; Cortés Mora, Víctor Antonio; Pontificia Universidad Católica de Chile. Escuela de Medicina
    La lipodistrofia congénita generalizada (LCG) está definida por reducción grave de tejido adiposo y complicaciones metabólicas como hiperfagia, hipoleptinemia, y resistencia insulínica. En este estudio utilizamos ratones Agpat2-/-, modelos de LCG. Como hipótesis se propone que la hiperfagia en ratones Agpat2-/- vs ratones normales (WT) se asocia a mayor gasto energético (GE) y mantención del peso corporal por oxidación aumentada de ácidos grasos (AG), representada con valores de cuociente respiratorio (RER). La infusión con leptina normaliza estas variables y revierte la oxidación aumentada de AG. Se analizaron dos estudios previos, el primer estudio utilizó ratones Agpat2-/- (infundidos con leptina) y ratones WT. En el segundo estudio se investigaron ratones Agpat2-/- (infundidos con leptina). Los ratones Agpat2-/- tuvieron un consumo de agua y alimento mayor (15 y 48%) que los ratones WT. El consumo de O2, producción de CO2 y GE también fue mayor en 1,43, 0,34 y 1,32% (P³0,05, N=4). En cuanto al RER de ratones Agpat2-/-, presentó valores promedio de ∽0,93, mientras que los ratones WT presentaron valores de RER de ∽0,97 (sin significancia estadística). La infusión con leptina permite que el consumo de alimento y agua se normalice al mismo nivel que en ratones WT. En el segundo estudio la infusión de leptina resultó en una reducción de 5,35% y de 8,81% en la ingesta de alimento y agua a 72 horas de iniciada la infusión. El GE en la cuarta semana de infusión presentó disminución de 8,14 y 4,81% en luz y oscuridad, en comparación con los valores pre infusión. Conclusiones: Los ratones Agpat2-/- presentan hiperfagia asociada a gasto energético elevado en comparación con ratones WT, las oscilaciones diarias de RER fueron menores en ratones Agpat2-/-, sugiriendo inflexibilidad metabólica. La infusión con leptina revirtió el GE aumentado y la hiperfagia en ratones Agpat2-/-.
  • Thumbnail Image
    Item
  • Thumbnail Image
    Item
    Caracterización de alteraciones mitocondriales durante la diferenciación in vitro de adipocitos pardos del ratón lipodistrófico Agpat2-/-
    (2022) Figueroa Toledo, Ana María; Cortés Mora, Víctor Antonio; Eisner Sagüés, Verónica Raquel; Pontificia Universidad Católica de Chile. Escuela de Medicina
    La lipodistrofia congénita generalizada (LCG) es una enfermedad de transmisión autosómica recesiva que consiste en reducción severa en la masa de tejido adiposo. Sus causas más frecuentes son mutaciones en el gen AGPAT2. El ratón knockout para Agpat2 (Agpat2-/-) es un modelo murino de LCG. AGPAT2 participa en la vía de los glicerolípidos que determina la síntesis de mono, di y triglicéridos y glicerofosfolípidos. AGPAT2 cataliza la adición de un acil graso-CoA en la posición sn-2 del 1 acil glicerofosfato (también llamado ácido lisofosfatídico) para producir ácido fosfatídico. Los mecanismos de la lipodistrofia secundaria a la inactivación de AGPAT2 permanecen desconocidos, sin embargo, en nuestro laboratorio encontramos que los ratones Agpat2-/- nacen con tejido adiposo de distribución anatómica y abundancia normal, el cual degenera rápida y completamente durante la primera semana de vida. El tejido adiposo es un regulador del balance energético y de la homeostasis lipídica y glucídica. En mamíferos existen dos tipos clásicos de tejido adiposo: el blanco y el pardo, ambos con características morfológicas y funcionales particulares. El ratón Agpat2-/- carece de ambos tipos de tejido adiposo. El tejido adiposo pardo es muy vascularizado y posee adipocitos con múltiples gotas de lípidos y un mayor número de mitocondrias. Su principal función es disipar energía en forma de calor, producto de la actividad de la proteína desacoplante UCP1. Esta proteína está localizada en la membrana mitocondrial interna y su actividad aumenta con la exposición al frío o la estimulación de receptores β-adrenérgicos. Fibroblastos embrionarios de ratón y preadipocitos Agpat2-/- diferenciados in vitro presentan un desbalance en la composición celular de fosfolípidos, entre ellos, menores niveles de fosfatidilglicerol. Este es el sustrato para la síntesis de cardiolipina, un fosfolípido sintetizado exclusivamente en las mitocondrias. La cardiolipina se localiza casi exclusivamente en la membrana mitocondrial interna, favoreciendo su plegamiento y la formación de crestas. Además, estabiliza los complejos proteicos de la cadena transportadora de electrones y otras proteínas involucradas en la respiración mitocondrial, incluyendo UCP1. La disminución en los niveles de cardiolipina o alteraciones en su composición de ácidos grasos, se han asociado a disfunción mitocondrial. Las mitocondrias son necesarias para la diferenciación de los adipocitos blancos y pardos, y es posible que anormalidades funcionales mitocondriales participen en la degeneración postnatal del tejido adiposo en los ratones Agpat2-/-. Los adipocitos Agpat2-/- diferenciados in vitro presentan anormalidades en la morfología mitocondrial, caracterizadas por menor densidad y orientación irregular de crestas. En un análisis transcriptómico previo a esta tesis, en nuestro laboratorio identificamos que adipocitos Agpat2-/- diferenciados in vitro presentan menor expresión de genes codificantes para subunidades de complejos mitocondriales, transportadores de electrones y enzimas involucradas en la β oxidación, así como ausencia total de UCP1. Con estos antecedentes, el objetivo general de esta tesis fue determinar si la diferenciación adipogénica defectuosa de adipocitos Agpat2-/- está asociada a una menor masa mitocondrial y defectos morfológicos de estos organelos. Para llevarlo a cabo, se utilizó un modelo de diferenciación adipogénica a partir de preadipocitos obtenidos de la fracción estromal vascular del tejido adiposo pardo interescapular de ratones Agpat2+/+ (wild type, WT) y Agpat2-/-. Nuestro trabajo mostró que los preadipocitos Agpat2-/- presentaron diferenciación adipogénica anormal, caracterizada por menor contenido de lípidos neutros ausencia de UCP1 en el día 7 de diferenciación. Además, los adipocitos diferenciados Agpat2-/- tuvieron menor masa mitocondrial, indicada por menor número de copias de mtDNA y menor abundancia de proteínas mitocondriales, a partir de los días 3 y 5 diferenciación, en relación a adipocitos WT. No encontramos diferencias en los niveles de PGC-1α y NRF1 y NRF2 entre adipocitos de ambos genotipos, sugiriendo que la menor masa mitocondrial en los adipocitos Agpat2-/- no es causada por menor biogénesis mitocondrial. Por otro lado, los adipocitos diferenciados Agpat2-/- presentaron mayor abundancia de las proteínas P62, LC3-II y PINK1 a partir de los días 3 – 5 de diferenciación, sugiriendo mayor remoción autofágica de mitocondrias en adipocitos Agpat2-/-. Coherentemente, observamos mayor abundancia de P62, LC3-II y ubiquitina en mitocondrias purificadas de adipocitos diferenciados Agpat2-/-, indicando aumento de la actividad mitofágica. En experimentos de inhibición del flujo autofágico con BafA1, corroboramos que adipocitos diferenciados Agpat2-/- presentan mayor abundancia de P62, LC3-II y marcadores mitocondriales en el día 3 y 7 de diferenciación, indicando una mayor remoción mitocondrial. A nivel morfológico, observamos que las mitocondrias de adipocitos diferenciados Agpat2-/- presentan mitocondrias de menor área y perímetro y sus crestas son irregulares en el día 7 de diferenciación. Estas anormalidades morfológicas se asociaron con menor abundancia de las enzimas formadoras de cardiolipina CRLS1, TAZ y subunidades del complejo MICOS. Para explorar la capacidad bioenergética de los adipocitos pardos diferenciados Agpat2-/-, cuantificamos la abundancia de los complejos proteicos de la cadena transportadora de electrones. Durante la diferenciación estos complejos aumentaron en adipocitos de ambos genotipos, sin embargo, estos fueron significativamente menores en adipocitos diferenciados Agpat2-/- en comparación con los WT a partir del día 5 de diferenciación. Además, los adipocitos diferenciados Agpat2-/ presentaron mayor potencial mitocondrial basal en el día 3 de diferenciación, sugiriendo hiperpolarización mitocondrial, no obstante, estas diferencias no se observaron en el día 7 de diferenciación. El contenido de ATP celular disminuyó en adipocitos de ambos genotipos a partir del día 3 de diferenciación. En adipocitos diferenciados Agpat2-/- la abundancia de enzimas involucradas en β oxidación y de la proteína MFN2, mediadora de la interacción entre mitocondrias y gotas lipídicas, fue menor a partir del día 5 – 7 de diferenciación en comparación con adipocitos WT. Coherentemente, observamos una menor superficie de contacto entre mitocondrias y gotas lipídicas en adipocitos diferenciados Agpat2-/-. En conclusión, los resultados de esta tesis muestran que los preadipocitos diferenciados Agpat2-/- presentan adipogénesis parda anormal, caracterizada por menor abundancia de gotas lipídicas, ausencia de UCP1 y anormalidades mitocondriales. Éstas últimas corresponden a: 1) menor masa mitocondrial asociada a aumento de la remoción autofágica de estos organelos, 2) menor tamaño mitocondrial, 3) crestas mitocondriales de morfología irregular, posiblemente secundaria a alteraciones en la síntesis y remodelación de cardiolipina y menor abundancia del complejo MICOS, 4) menor capacidad β oxidativa y 5) menor interacción física estrecha entre mitocondrias y gota lipídicas. Es posible que estas anormalidades adipogénicas y mitocondriales determinen susceptibilidad aumentada a los efectos tóxicos de los ácidos grasos y por este mecanismo, muerte de adipocitos y, en último término, lipodistrofia en los ratones Agpat2-/-.
  • Thumbnail Image
    Item
    Caracterización de la patología renal a nivel ultraestructural y molecular en el ratón lipodistrófico Agpat2 -/-
    (2022) Tiscornia González, Caterina; Cortés Mora, Víctor Antonio; Pontificia Universidad Católica de Chile. Facultad de Medicina
    La Lipodistrofia congénita generalizada [LCG] es una condición patológica de transmisión autosómica recesiva, causada principalmente por mutaciones en el gen AGPAT2. Está asociada al desarrollo de resistencia insulínica severa, secundaria al depósito ectópico de lípidos y ausencia de adipoquinas, desarrollando hipertrigliceridemia, esteatosis hepática y diabetes. Adicionalmente, se ha asociado con la presencia de proteinuria y enfermedad renal ER. Objetivo general. Caracterizar la presencia de alteraciones asociadas a patología renal a nivel ultraestructural y molecular en ratones adultos Agpat2-/-. Métodos. Se evaluó la ultraestructura renal mediante microscopía electrónica de transmisión y la expresión de genes mediante RT-PCR. Los datos se expresaron como media y desviación estándar. Para determinar las diferencias en la cantidad relativa de mRNA de genes involucrados en la ER, se utiizó t de Student. Resultados. Ratones adultos Agpat2-/- presentaron alteraciones en la ultraestructura renal, destacando una marcada expansión mesangial y fusión pedicelar. No se encontraron diferencias significativas en los niveles de mRNA de marcadores de lipogénesis, gluconeogénesis, reabsorción tubular de glucosa, agua y fibrosis. Conclusiones. Los ratones Agpat2 -/- presentan alteraciones en la estructura glomerular. En futuros estudios se completará el análisis histológico, ultraestructural y molecular del riñón de estos animales y se determinarán sus defectos funcionales.
  • Thumbnail Image
    Item
    Carbohydrate, fat and protein metabolism in obesity
    (2015) Galgani Fuentes, José; Cortés Mora, Víctor Antonio; Carrasco, Fernando; Ahima, Rexford S.
  • Thumbnail Image
    Item
    Desbalance en los niveles de colesterol y esfingolípidos y su efecto en la pérdida de caveolas, señalización insulínica y diferenciación en adipocitos Agpat2-/-.
    (2020) González Hódar, Lila Alejandra; Cortés Mora, Víctor Antonio; Pontificia Universidad Católica de Chile. Facultad de Medicina
    El tejido adiposo es un regulador del balance energético y de la homeostasis glucídica y lipídica en mamíferos. La lipodistrofia congénita generalizada (LCG) es un síndrome caracterizado por reducción severa de la masa de tejido adiposo corporal total y complicaciones metabólicas. Mutaciones en el gen AGPAT2 son la causa más frecuente de LCG. AGPAT2 codifica para la enzima 1-acilglicerol-3-fosfato aciltransferasa 2, que cataliza la síntesis de ácido fosfatídico a partir de ácido lisofosfatídico en la vía de síntesis de los glicerolípidos. Los mecanismos que determinan la LCG dependiente de mutaciones en AGPAT2 no están dilucidados. Los ratones deficientes en AGPAT2 (Agpat2-/- ) nacen con tejido adiposo blanco y pardo, pero este degenera durante la primera semana de vida postnatal, como resultado de muerte selectiva de adipocitos e infiltración inflamatoria del tejido adiposo. Por otro lado, fibroblastos embrionarios de ratón (MEFs) y preadipocitos aislados a partir del tejido adiposo de ratones Agpat2-/- presentan adipogénesis deteriorada in vitro, caracterizada por menor abundancia de gotas lipídicas y menor expresión génica de reguladores de la adipogénesis. El análisis ultraestructural de adipocitos del tejido adiposo de ratones Agpat2-/- y MEFs Agpat2-/- diferenciados adipogénicamente in vitro mostró una cantidad significativamente disminuida de caveolas. Las caveolas son microdominios de la membrana plasmática de 50 a 100 nm de diámetro, muy abundantes en adipocitos y células endoteliales. Están involucradas en funciones importantes del adipocito: unión, transporte intracelular y almacenamiento de ácidos grasos y colesterol, activación de vías de señalización adipogénicas y protección contra los efectos lipotóxicos de niveles elevados de ácidos grasos. La formación de caveolas requiere la presencia de las proteínas caveolina-1 y cavina-1, y una adecuada composición lipídica de la membrana plasmática (MP), caracterizada por enriquecimiento de colesterol y esfingolípidos. El objetivo general de esta tesis fue determinar el mecanismo por el cual adipocitos Agpat2- /- presentan un bajo número de caveolas y el rol potencial de las caveolas en la patogenia de la lipodistrofia en ratones Agpat2-/- . Para esto, combinamos experimentación in vitro usando un modelo de diferenciación adipogénica a partir de preadipocitos obtenidos de la fracción estromalvascular del tejido adiposo pardo interescapular de estos animales, e in vivo, analizando el tejido adiposo de ratones Agpat2-/- durante sus primeros días de vida postnatal, en etapas anteriores a su degeneración inflamatoria. Primero, confirmamos que tanto el tejido adiposo pardo interescapular de ratones Agpat2- /- como adipocitos Agpat2-/- diferenciados in vitro presentan un bajo número de caveolas en comparación con animales y adipocitos en cultivo Agpat2+/+ (wild type). Sin embargo, y contrario a lo esperado, la vía de insulina, que ha sido reportada como dependiente de caveolas, se encuentra preservada en adipocitos Agpat2-/- diferenciados in vitro, y su nivel de activación no se modifica a lo largo de todos los días de diferenciación evaluados. No encontramos diferencias en la abundancia de proteínas caveolina-1 y cavina-1 pero sí en su localización subcelular a día 5 y 10 de diferenciación. Así, mientras en adipocitos wild type ambas proteínas presentan localización en la periferia de las células, compatible con una destinación en la MP, en adipocitos Agpat2-/- presentan una localización intracelular, con formación de agregados o acúmulos de tamaño heterogéneo. El análisis de composición lipídica celular total mostró que en el día 0 de diferenciación adipogénica no hay diferencias en los niveles de las diferentes especies de lípidos evaluados entre preadipocitos de ambos genotipos. Por el contrario, en el día 10 de diferenciación, los adipocitos Agpat2-/- presentaron agregaciones o acúmulos de colesterol intracelular, junto con mayores niveles de 7-dehidrodesmoterol y esfingomielina, y menores niveles de fosfatidiletanolamina y lisofosfatidiletanolamina. Los acúmulos de colesterol intracelular también fueron detectados en el tejido adiposo blanco subcutáneo (día postnatal P0.5 y P2.5) y en el tejido adiposo pardo interescapular (día postnatal P4.5) de ratones Agpat2-/- pero no wild type. Además, el tejido adiposo pardo interescapular de ratones Agpat2-/- posee mayor abundancia de ceramidas en combinación con menores niveles de los fosfolípidos fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol, ácido fosfatídico, lisofosfatidilcolina y lisofosfatidiletanolamina en el día postnatal P4.5. Para evaluar posibles mecanismos involucrados en los desbalances lipídicos de los adipocitos Agpat2-/- , cuantificamos los niveles de mRNA de algunos genes clave del metabolismo de colesterol y esfingolípidos en tres tiempos de diferenciación adipogénica in vitro. No observamos diferencias entre genotipos en el perfil de expresión génica en los días 0 y 5 de diferenciación, sin embargo, en el día 10, los adipocitos Agpat2-/- presentan niveles aumentados tanto de los genes Abca1, Ldlr, Lrp, Srbi, Srebp2 y Hmg-CoAR, implicados en la homeostasis del colesterol así como de Sptlc2, Asah1, GlcT y Smpd1, los que están involucrados en la síntesis de esfingolípidos. Para estudiar de forma directa la participación de lípidos de la MP en la deficiencia de caveolas en lo adipocitos deficientes en AGPAT2, determinamos la composición lipídica de preparaciones purificadas de MP de adipocitos diferenciados adipogénicamente in vitro y del tejido adiposo interescapular de ratones recién nacidos. No encontramos diferencias en los niveles de colesterol, esteroles y esfingolípidos entre células Agpat2-/- y wild type en el día 0 de diferenciación (cuando las células corresponden a preadipocitos), pero sí mayores niveles de fosfatidilglicerol en preadipocitos Agpat2-/- . En el día 10 de diferenciación, la MP de los adipocitos Agpat2-/- presentó mayor abundancia de fosfatidilserina y 8(9)-dehidrocolesterol. En la MP del tejido adiposo pardo interescapular de ratones recién nacidos, no encontramos diferencias en los niveles de colesterol entre genotipos, pero sí mayores niveles de zimosterol y FFMAS en ratones Agpat2-/- . Por lo tanto, con nuestros resultados podemos concluir que el número reducido de caveolas en adipocitos Agpat2-/- se asocia a niveles elevados de fosfatidilglicerol en el estado de preadipocito (día 0 post inducción adipogénica) y niveles elevados de fosfatidilserina en el estado de adipocito (día 10 post inducción adipogénica). Además, es posible que alteraciones en la distribución celular de caveolina-1 y cavina-1 contribuyan al déficit en el número de caveolas. Estas alteraciones podrían conducir a un tráfico anormal de colesterol, que determina la presencia de acúmulos intracelulares de este lípido y mayor actividad biosintética de colesterol, producto de su retención en compartimentos que previenen su destinación normal a la membrana del RE. Por otro lado, la deficiencia de caveolas podría promover o facilitar la muerte celular lipotóxica de los adipocitos Agpat2-/- , producto de su mayor sensibilidad a ácidos grasos y también por la acumulación excesiva de depósitos intracelulares de colesterol.El tejido adiposo es un regulador del balance energético y de la homeostasis glucídica y lipídica en mamíferos. La lipodistrofia congénita generalizada (LCG) es un síndrome caracterizado por reducción severa de la masa de tejido adiposo corporal total y complicaciones metabólicas. Mutaciones en el gen AGPAT2 son la causa más frecuente de LCG. AGPAT2 codifica para la enzima 1-acilglicerol-3-fosfato aciltransferasa 2, que cataliza la síntesis de ácido fosfatídico a partir de ácido lisofosfatídico en la vía de síntesis de los glicerolípidos. Los mecanismos que determinan la LCG dependiente de mutaciones en AGPAT2 no están dilucidados. Los ratones deficientes en AGPAT2 (Agpat2-/- ) nacen con tejido adiposo blanco y pardo, pero este degenera durante la primera semana de vida postnatal, como resultado de muerte selectiva de adipocitos e infiltración inflamatoria del tejido adiposo. Por otro lado, fibroblastos embrionarios de ratón (MEFs) y preadipocitos aislados a partir del tejido adiposo de ratones Agpat2-/- presentan adipogénesis deteriorada in vitro, caracterizada por menor abundancia de gotas lipídicas y menor expresión génica de reguladores de la adipogénesis. El análisis ultraestructural de adipocitos del tejido adiposo de ratones Agpat2-/- y MEFs Agpat2-/- diferenciados adipogénicamente in vitro mostró una cantidad significativamente disminuida de caveolas. Las caveolas son microdominios de la membrana plasmática de 50 a 100 nm de diámetro, muy abundantes en adipocitos y células endoteliales. Están involucradas en funciones importantes del adipocito: unión, transporte intracelular y almacenamiento de ácidos grasos y colesterol, activación de vías de señalización adipogénicas y protección contra los efectos lipotóxicos de niveles elevados de ácidos grasos. La formación de caveolas requiere la presencia de las proteínas caveolina-1 y cavina-1, y una adecuada composición lipídica de la membrana plasmática (MP), caracterizada por enriquecimiento de colesterol y esfingolípidos. El objetivo general de esta tesis fue determinar el mecanismo por el cual adipocitos Agpat2- /- presentan un bajo número de caveolas y el rol potencial de las caveolas en la patogenia de la lipodistrofia en ratones Agpat2-/- . Para esto, combinamos experimentación in vitro usando un modelo de diferenciación adipogénica a partir de preadipocitos obtenidos de la fracción estromalvascular del tejido adiposo pardo interescapular de estos animales, e in vivo, analizando el tejido adiposo de ratones Agpat2-/- durante sus primeros días de vida postnatal, en etapas anteriores a su degeneración inflamatoria. Primero, confirmamos que tanto el tejido adiposo pardo interescapular de ratones Agpat2- /- como adipocitos Agpat2-/- diferenciados in vitro presentan un bajo número de caveolas en comparación con animales y adipocitos en cultivo Agpat2+/+ (wild type). Sin embargo, y contrario a lo esperado, la vía de insulina, que ha sido reportada como dependiente de caveolas, se encuentra preservada en adipocitos Agpat2-/- diferenciados in vitro, y su nivel de activación no se modifica a lo largo de todos los días de diferenciación evaluados. No encontramos diferencias en la abundancia de proteínas caveolina-1 y cavina-1 pero sí en su localización subcelular a día 5 y 10 de diferenciación. Así, mientras en adipocitos wild type ambas proteínas presentan localización en la periferia de las células, compatible con una destinación en la MP, en adipocitos Agpat2-/- presentan una localización intracelular, con formación de agregados o acúmulos de tamaño heterogéneo. El análisis de composición lipídica celular total mostró que en el día 0 de diferenciación adipogénica no hay diferencias en los niveles de las diferentes especies de lípidos evaluados entre preadipocitos de ambos genotipos. Por el contrario, en el día 10 de diferenciación, los adipocitos Agpat2-/- presentaron agregaciones o acúmulos de colesterol intracelular, junto con mayores niveles de 7-dehidrodesmoterol y esfingomielina, y menores niveles de fosfatidiletanolamina y lisofosfatidiletanolamina. Los acúmulos de colesterol intracelular también fueron detectados en el tejido adiposo blanco subcutáneo (día postnatal P0.5 y P2.5) y en el tejido adiposo pardo interescapular (día postnatal P4.5) de ratones Agpat2-/- pero no wild type. Además, el tejido adiposo pardo interescapular de ratones Agpat2-/- posee mayor abundancia de ceramidas en combinación con menores niveles de los fosfolípidos fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol, ácido fosfatídico, lisofosfatidilcolina y lisofosfatidiletanolamina en el día postnatal P4.5. Para evaluar posibles mecanismos involucrados en los desbalances lipídicos de los adipocitos Agpat2-/- , cuantificamos los niveles de mRNA de algunos genes clave del metabolismo de colesterol y esfingolípidos en tres tiempos de diferenciación adipogénica in vitro. No observamos diferencias entre genotipos en el perfil de expresión génica en los días 0 y 5 de diferenciación, sin embargo, en el día 10, los adipocitos Agpat2-/- presentan niveles aumentados tanto de los genes Abca1, Ldlr, Lrp, Srbi, Srebp2 y Hmg-CoAR, implicados en la homeostasis del colesterol así como de Sptlc2, Asah1, GlcT y Smpd1, los que están involucrados en la síntesis de esfingolípidos. Para estudiar de forma directa la participación de lípidos de la MP en la deficiencia de caveolas en lo adipocitos deficientes en AGPAT2, determinamos la composición lipídica de preparaciones purificadas de MP de adipocitos diferenciados adipogénicamente in vitro y del tejido adiposo interescapular de ratones recién nacidos. No encontramos diferencias en los niveles de colesterol, esteroles y esfingolípidos entre células Agpat2-/- y wild type en el día 0 de diferenciación (cuando las células corresponden a preadipocitos), pero sí mayores niveles de fosfatidilglicerol en preadipocitos Agpat2-/- . En el día 10 de diferenciación, la MP de los adipocitos Agpat2-/- presentó mayor abundancia de fosfatidilserina y 8(9)-dehidrocolesterol. En la MP del tejido adiposo pardo interescapular de ratones recién nacidos, no encontramos diferencias en los niveles de colesterol entre genotipos, pero sí mayores niveles de zimosterol y FFMAS en ratones Agpat2-/- . Por lo tanto, con nuestros resultados podemos concluir que el número reducido de caveolas en adipocitos Agpat2-/- se asocia a niveles elevados de fosfatidilglicerol en el estado de preadipocito (día 0 post inducción adipogénica) y niveles elevados de fosfatidilserina en el estado de adipocito (día 10 post inducción adipogénica). Además, es posible que alteraciones en la distribución celular de caveolina-1 y cavina-1 contribuyan al déficit en el número de caveolas. Estas alteraciones podrían conducir a un tráfico anormal de colesterol, que determina la presencia de acúmulos intracelulares de este lípido y mayor actividad biosintética de colesterol, producto de su retención en compartimentos que previenen su destinación normal a la membrana del RE. Por otro lado, la deficiencia de caveolas podría promover o facilitar la muerte celular lipotóxica de los adipocitos Agpat2-/- , producto de su mayor sensibilidad a ácidos grasos y también por la acumulación excesiva de depósitos intracelulares de colesterol.
  • No Thumbnail Available
    Item
    Eating behaviour in contrasting adiposity phenotypes: Monogenic obesity and congenital generalized lipodystrophy
    (2021) Santos Martín, José Luis; Cortés Mora, Víctor Antonio
    Most known types of nonsyndromic monogenic obesity are caused by rare mutations in genes of the leptin-melanocortin pathway controlling appetite and adiposity. In contrast, congenital generalized lipodystrophy represents the most extreme form of leanness in humans caused by recessive mutations in four genes involved in phospholipid/triglyceride synthesis and lipid droplet/caveolae structure. In this disease, the inability to store triglyceride in adipocytes results in hypoleptinemia and ectopic hepatic and muscle fat accumulation leading to fatty liver, hypertriglyceridemia and severe insulin resistance. As a result of hypoleptinemia, patients with lipodystrophy show alterations in eating behaviour characterized by constant increased energy intake. As it occurs in obesity caused by genetic leptin deficiency, exogenous leptin rapidly reduces hunger scores in patients with congenital generalized lipodystrophy, with additional beneficial effects on glucose homeostasis and metabolic profile normalization. The melanocortin-4 receptor agonist setmelanotide has been used in the treatment of monogenic obesities. There is only one report on the effect of setmelanotide in a patient with partial lipodystrophy resulting in mild reductions in hunger scores, with no improvements in metabolic status. The assessment of contrasting phenotypes of obesity/leanness represents an adequate strategy to understand the pathophysiology and altered eating behaviour associated with adipose tissue excessive accumulation/paucity.
  • Thumbnail Image
    Item
    Efectos de la deleción de FGF21 sobre la resistencia a la insulina en un modelo murino de obesidad severa.
    (2023) García Cruz, Maricarmen; Cortés Mora, Víctor Antonio; Pontificia Universidad Católica de Chile. Escuela de Medicina
    Antecedentes: El factor de crecimiento fibroblástico 21 (FGF21) es una hormona peptídica expresada y secretada principalmente por el hígado. Su administración en dosis farmacológicas en modelos murinos de obesidad mejora la tolerancia a la glucosa, sensibilidad a la insulina y reduce los niveles de triglicéridos hepáticos. Objetivo: Determinar el efecto de la eliminación génica de FGF21 en un modelo de resistencia a la insulina severa asociado a obesidad. Métodos: Ratones obesos deficientes en el receptor de leptina (db/db) que carecían de FGF21 (db/db; Fgf21-/-) fueron caracterizados a los ocho meses de edad. La abundancia de proteínas hepáticas involucradas en la señalización de insulina se determinó por Western Blot. Los niveles plasmáticos de glucosa, insulina, se determinaron mediante técnicas enzimáticas y Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA). La concentración de triglicéridos y colesterol hepáticos se determinó por técnicas enzimáticas. Los datos obtenidos se analizaron con el programa GradPad Prism 6.0 utilizando la prueba estadística de análisis de varianza de una vía (ANOVA). Resultados: El peso normalizado de los hígados de ratones db/db; Fgf21-/- (6,6±0,6 %) fue significativamente mayor al resto de los grupos. No se observaron diferencias en la abundancia de componentes de la vía de señalización de insulina hepática entre grupos. El grupo db/db; Fgf21-/- presento una tendencia al alza en concentraciones de insulina plasmática (66± 74ng/mL), en niveles hepáticos de triglicéridos (84±10mg/g) y colesterol (3±1.3mg/g), así como niveles significativamente más elevados de triglicéridos plasmáticos (86±1.3mg/dL) con respecto a ratones db/db; Fgf21+/+ y ratones control con receptor de leptina intacto (WT/WT; Fgf21+/+ y WT/WT; Fgf21-/-). Conclusión: La deleción de FGF21 determina mayor hiperinsulinemia y hepatomegalia, posiblemente por acumulación aumentada de lípidos en ratones con resistencia insulínica, sugiriendo que la ausencia de esta hormona agrava la severidad de la resistencia insulínica en animales obesos.
  • Thumbnail Image
    Item
    Effect of cholecystectomy on hepatic fat accumulation and insulin resistance in non-obese Hispanic patients : a pilot study
    (2017) Cortés Mora, Víctor Antonio; Quezada Sanhueza, Nicolás; Uribe Arancibia, Sergio A.; Arrese Jiménez, Marco; Nervi, Flavio
    Abstract Background Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) is highly prevalent worldwide. Experimental studies have shown that cholecystectomy (XGB) increases hepatic fat content in mice and appears associated to NAFLD in large retrospective population-based studies. The aim of this study was to prospectively assess the effects of XGB on hepatic fat content (HFC) and insulin resistance (IR) in non-obese, middle aged Hispanic subjects. Methods Twenty-six gallstone patients undergoing elective XGB and 16 control subjects with normal livers and gallbladders at ultrasonography were prospectively followed 24 months for changes in HFC and IR. Clinical, biochemical determinations and hepatic imaging were performed at baseline and 24 months after surgery. MRI technique quantified HFC in four hepatic segments. IR was assessed by the Homeostasis Model Assessment (HOMA-IR) index. Results Initial body mass index (BMI) was 25.6 ± 0.4 and 24.3 ± 1.0 in the control and XGB groups of subjects, respectively. Serum insulin level increased from 8.1 ± 0.7 to 10.0 ± 1.9 (μU/ml) 24 months after surgery in XGB patients (p < 0.05); no significant changes were detected in control individuals. Median HOMA-IR index increased from 1.31 (interquartile range, 1.01-1.68) to 2.20 (interquartile range, 1.57 - 2.60) 24 months after XGB, (p < 0.003). Median HOMA-IR index of control subjects remained unchanged at the end of the study. Serum apoB concentration increased from 61.5 ± 3.4 to 79.0 ± 7.8 (μg/ml) in XGB patients (p < 0.03). Serum apoB levels remained within normal ranges in both periods of the study in control subjects. HFC significantly increased in 2 of the 4 segments 24 months after XGB: right posterior hepatic lobe (from 5.3 ± 0.2% to 6.0 ± 0.2%, p > 0.04) and right anterior hepatic lobe (from 5.8 ± 0.2% to 6.6 ± 0.3%, p < 0.02). The average HFC of the four hepatic segments studied slightly increased from 5.4 ± 0.2 to 5.8 ± 0.3 2 years after XGB (p < 0.03). No significant changes were found in HFC in the control subjects at the end of the study. Conclusions Elective XGB increases HFC, HOMA-IR index and serum apoB concentration. These results support the notion that XGB is a risk factor non-alcoholic fatty liver disease and other IR – associated disease conditions.
  • Thumbnail Image
    Item
    Effects of Aerobic Exercise in Hepatic Lipid Droplet-Mitochondria interaction in Non-alcoholic Fatty Liver Disease
    (2023) Bórquez, Juan Carlos; Díaz-Castro, Francisco; La Fuente, Francisco Pino-De; Espinoza, Karla; Figueroa Toledo, Ana María; Martínez-Ruíz, Inma; Hernández, Vanessa; López-Soldado, Iliana; Ventura, Raúl; Espinosa, Alejandra; Cortés Mora, Víctor Antonio; Hernández-Alvarez, María Isabel; Troncoso, Rodrigo
    Lipid Droplets (LD) are highly dynamic storage organelles. In the liver, its accumulation causes non-alcoholic fatty liver (NAFL) that can progress to a more severe disease stage, nonalcoholic steatohepatitis (NASH). In hepatic and non-hepatic tissues LD interacts with mitochondria impacting lipid homeostasis. However, whether exercise modulates this interaction in the liver has not been studied yet. Our objective is to determine whether exercise modifies LD-mitochondria interaction in hepatocytes and if this interaction has an association with the severity of the disease. Two different models of NAFLD, a high fat diet (HFD) to evaluate NAFL and a methionine choline deficient diet (MCD) to evaluate NASH, were used to analyze the effects of aerobic exercise in the liver. Our results in the NAFL model showed that exercise decreased the severity of the disease and improved physical capacity compared to sedentary HFD mice. In this regard, although exercise increased the number of LD in hepatocytes, LD were smaller in size than in the sedentary HFD mice. Notably, while sedentary HFD mice increased hepatic lipid droplet (LD)-mitochondria interaction, in exercised animals, this interaction was decreased. Additionally, exercise decreased the size of the LD bound to mitochondria, and this peridroplet mitochondria (PDM) exhibited higher basal respiration and ATP synthesis capacity than PDM from sedentary HFD mice. Besides, we found a positive correlation that predicts the severity of NAFL between LD-mitochondria interaction in the liver and plasmatic ALT transaminases. This correlation is also positive between hepatic LD-mitochondria interaction and the area under the glucose tolerance test curve in this model. Our results in the NASH model resemble, to a greater extent, what we observed in the NAFL model. In NASH, exercise also reduced collagen accumulation, decreased LD-mitochondria interaction, and reduced the size of LD coupled to mitochondria compared to sedentary MCD mice. In all, our results show that aerobic exercise decreases LD-mitochondria interaction in hepatocytes and this interaction is associated with less severity of NAFL and NASH. We propose that exercise provokes an improvement of NAFLD by reduction of the hepatic LD-mitochondria interaction that in turn increase peridroplet mitochondria activity. The copyright holder for this preprint is the author/funder, who has granted bioRxiv a license to display the preprint in perpetuity. All rights reserved. No reuse allowed without permission.
  • Thumbnail Image
    Item
  • Thumbnail Image
    Item
    Fluoxetine Impairs Insulin Secretion without Modifying Extracellular Serotonin Levels in MIN6 β-cells
    (2015) Cataldo Bascuñan, Luis Rodrigo; Cortés Mora, Víctor Antonio; Mizgier Rojas, María Luisa; Aranda, E.; Mezzano, Diego; Olmos Coelho, Pablo Roberto; Galgani Fuentes, José; Suazo, J.; Santos Martín, José Luis
  • Thumbnail Image
    Item
    Increased expression of syndecan-1 protects against cardiac dilatation and dysfunction after myocardial infarction
    (2007) Vanhoutte, D.; Schellings, M.W.M.; Götte, M.; Swinnen, M.; Herias, V.; Wild, M.K.; Vestweber, D.; Chorianopoulos, E.; Cortés Mora, Víctor Antonio; Rigotti Rivera, Attilio; Stepp, M.-A.; Van De Werf, F.; Carmeliet, P.; Pinto, Y.M.; Heymans, S.
  • Thumbnail Image
    Item