Browsing by Author "Arancibia Radich, Duxan Andrés"

Now showing 1 - 4 of 4
  • Thumbnail Image
    Item
    Development of a Bicistronic Vector for the Expression of a CRISPR/Cas9-mCherry System in Fish Cell Lines
    (2019) Escobar Aguirre, Sebastián Gonzalo; Arancibia Radich, Duxan Andrés; Escorza, A.; Bravo, C.; Andrés Coke, María Estela; Zamorano, P.; Martinez, V.
  • Thumbnail Image
    Item
    OPA1 disease-causing mutants have domain-specific effects on mitochondrial ultrastructure and fusion.
    (2023) Cartes Saavedra, Benjamín Tomás; Lagos Quiñones, Daniel Alejandro; Macuada, Josefa; Arancibia Radich, Duxan Andrés; Burté, Florence; Sjoberg, Marcela K.; Andrés Coke, María Estela; Horvath, Rita; Yu-Wai-Man, Patrick; Hajnoczky, Gyorgy; Eisner Sagüés, Verónica Raquel
    Inner mitochondrial membrane fusion and cristae shape depend on optic atrophy protein 1, OPA1. Mutations in OPA1 lead to autosomal dominant optic atrophy (ADOA), an important cause of inherited blindness. The Guanosin Triphosphatase (GTPase) and GTPase effector domains (GEDs) of OPA1 are essential for mitochondrial fusion; yet, their specific roles remain elusive. Intriguingly, patients carrying OPA1 GTPase mutations have a higher risk of developing more severe multisystemic symptoms in addition to optic atrophy, suggesting pathogenic contributions for the GTPase and GED domains, respectively. We studied OPA1 GTPase and GED mutations to understand their domain-specific contribution to protein function by analyzing patient-derived cells and gain-of-function paradigms. Mitochondria from OPA1 GTPase (c.870+5G>A and c.889C>T) and GED (c.2713C>T and c.2818+5G>A) mutants display distinct aberrant cristae ultrastructure. While all OPA1 mutants inhibited mitochondrial fusion, some GTPase mutants resulted in elongated mitochondria, suggesting fission inhibition. We show that the GED is dispensable for fusion and OPA1 oligomer formation but necessary for GTPase activity. Finally, splicing defect mutants displayed a posttranslational haploinsufficiency-like phenotype but retained domain-specific dysfunctions. Thus, OPA1 domain-specific mutants result in distinct impairments in mitochondrial dynamics, providing insight into OPA1 function and its contribution to ADOA pathogenesis and severity.
  • Thumbnail Image
    Item
    Revealing RCOR2 as a regulatory component of nuclear speckles
    (2021) Rivera Álvarez, Carlos Andrés; Verbel Vergara, Daniel Eduardo; Arancibia Radich, Duxan Andrés; Lappala, Anna; González, Marcela; Guzmán, Fabián; Merello, Gianluca; Lee, Jeannie T.; Andrés Coke, María Estela
    Background: Nuclear processes such as transcription and RNA maturation can be impacted by subnuclear compartmentalization in condensates and nuclear bodies. Here, we characterize the nature of nuclear granules formed by REST corepressor 2 (RCOR2), a nuclear protein essential for pluripotency maintenance and central nervous system development. Results: Using biochemical approaches and high-resolution microscopy, we reveal that RCOR2 is localized in nuclear speckles across multiple cell types, including neurons in the brain. RCOR2 forms complexes with nuclear speckle components such as SON, SRSF7, and SRRM2. When cells are exposed to chemical stress, RCOR2 behaves as a core component of the nuclear speckle and is stabilized by RNA. In turn, nuclear speckle morphology appears to depend on RCOR2. Specifically, RCOR2 knockdown results larger nuclear speckles, whereas overexpressing RCOR2 leads to smaller and rounder nuclear speckles. Conclusion: Our study suggests that RCOR2 is a regulatory component of the nuclear speckle bodies, setting this co-repressor protein as a factor that controls nuclear speckles behavior.
  • Thumbnail Image
    Item
    Role of cerebral dopamine neurotrophic factor in endoplasmic reticulum stress.
    (2019) Arancibia Radich, Duxan Andrés; Andrés Coke, María Estela; Pontificia Universidad Católica de Chile. Facultad de Ciencias Biológicas
    El factor neurotrófico cerebral dopaminérgico (CDNF) es un péptido de 187 aminoácidos localizado en el retículo endoplasmático de numerosos tipos celulares y conservado evolutivamente. CDNF ejerce un efecto protector sobre las neuronas en modelos celulares y animales de diversas enfermedades neurodegenerativas, pero se desconoce el mecanismo molecular de este efecto. Muchas enfermedades neurodegenerativas se han relacionado con una desregulación de la proteostasis en el retículo endoplásmico. La desregulación de la proteostasis produce estrés reticular lo que gatilla inicialmente la respuesta adaptativa a proteínas mal plegadas y, si el estrés persiste en el tiempo, se inducen vías de señalización relacionadas a la muerte celular o apoptosis. Varios estudios han revelado que una respuesta adaptativa resuelve el estrés de retículo endoplasmático atenuando la síntesis de proteínas, induciendo la expresión de chaperonas y metabolizando las proteínas mal plegadas. En esta tesis, investigamos si CDNF regula la proteostasis del retículo endoplásmico. Con este fin, se determinó la función de CDNF en un modelo de estrés de retículo endoplásmico inducido por Tapsigargina, en células HEK293-T y neuronas hipocampales en cultivo. Se observó que la expresión de CDNF aumentó significativamente la viabilidad de células HEK293-T expuestas a Tapsigargina. Este efecto, correlacionó con aumento de los niveles de proteínas protectoras de la respuesta a proteína mal plegada temprana tales como BiP, ATF4, ATF6 y XBP-1, tanto en las células HEK293-T como en neuronas. Además, la expresión de CDNF redujo los niveles de las proteínas pro-apoptóticas CHOP y caspasa-3 activa. Se determinó que CDNF protege a las células desde el retículo endoplásmico, dado que una versión mutante de CDNF carente de la secuencia de retención en retículo endoplásmico, y por lo tanto secretada, no protegió a las células frente al estrés inducido por Tapsigargina. En conclusión, CDNF regula la proteostasis en retículo endoplásmico induciendo la respuesta a proteína mal plegada adaptativa e inhibiendo las vías pro-apoptóticas activadas por el estrés de retículo endoplásmico. Finalmente, en la última parte de esta tesis se diseñó y construyó un dispositivo molecular de expresión regulada de CDNF, que combina métodos optogenéticos con una plataforma lentiviral.