Estudio del efecto de metformina en el rol proangiogénico de las plaquetas sobre células endoteliales y células de cáncer de ovario
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Date
2019
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Abstract
El cáncer de ovario (CO) es el cáncer ginecológico más letal y la 7ª causa de muerte por cáncer
en mujeres. Aproximadamente el 40% de las pacientes con CO presenta un elevado conteo
plaquetario (Trombocitosis), fenómeno que se ha correlacionado independientemente con un
mal pronóstico en estas pacientes. Es sabido que factores proangiogénicos liberados desde
plaquetas activadas promueven la angiogénesis tumoral, contribuyendo al crecimiento del tumor
y posterior metástasis. El tratamiento actual para el CO incluye cirugía citorreductiva seguido
de quimioterapia, sin embargo, muchas pacientes recurren en la enfermedad a los pocos meses.
Terapia antiangiogénica, un tratamiento alternativo, ha mostrado reducido beneficio clínico y
elevados efectos adversos. Metformina, primera línea de tratamiento para la Diabetes tipo II, ha
mostrado una disminución en el riesgo de desarrollar CO en pacientes diabéticas, sin embargo,
el mecanismo se desconoce. Estudios in vitro han sugerido que Metformina a concentraciones
supra farmacológicas puede tener un efecto antiangiogénico. Sin embargo, no existen reportes
que evalúen el efecto del fármaco sobre el rol proangiogénico de las plaquetas, usando
concentraciones presentes en plasma de pacientes diabéticas,. El objetivo del presente estudio
fue dilucidar el efecto de Metformina a concentraciones terapéuticas sobre la reducción de la
angiogénesis promovida por plaquetas, tanto directamente sobre células endoteliales, como
sobre el potencial angiogénico de células de CO. Cultivo primario proveniente de pacientes con
CO, líneas celulares de CO y cultivo primario de células endoteliales provenientes de vena
umbilical humana (HUVEC) fueron utilizadas en este estudio. Metformina 20µM
(concentración observada en plasma de pacientes diabéticos) reduce significativamente la
angiogénesis (medida utilizando el ensayo in vitro de formación de estructuras tipo capilar)
promovida por la adición directa de plaquetas o Medio Condicionado proveniente de células de
cáncer previamente incubadas con plaquetas. El efecto de Metformina no involucró disminución
en la viabilidad celular o reducción en la activación plaquetaria. Curiosamente, Metformina se
requirió estar presente durante todo el tiempo de la incubación de plaquetas con células
endoteliales para ejercer su efecto antiangiogénico, debido a que un pretratamiento a las células
endoteliales o plaquetas con Metformina no afectaron la angiogénesis promovida por plaquetas.
La adición de Compuesto C (un conocido inhibidor de AMPK, aunque con otras acciones
reportadas) no afecta la acción proangiogénica de las plaquetas sobre células endoteliales,
indicando que la acción de AMPK no es requerida para la activación plaquetaria o promoción
de la angiogénesis. A pesar de que, la presencia de Compuesto C revirtió la acción de
Metformina, no observamos activación de AMPK en células endoteliales y, por ende, futuros
experimentos permitirán identificar las vías de transducción internas usadas por Metformina
para eliminar la respuesta a plaquetas. Nosotros proponemos que concentraciones de
Metformina ya aprobadas para el tratamiento de la diabetes se deben investigar en un ensayo
clínico prospectivo en pacientes con cáncer de ovario que no presenten diabetes.El cáncer de ovario (CO) es el cáncer ginecológico más letal y la 7ª causa de muerte por cáncer
en mujeres. Aproximadamente el 40% de las pacientes con CO presenta un elevado conteo
plaquetario (Trombocitosis), fenómeno que se ha correlacionado independientemente con un
mal pronóstico en estas pacientes. Es sabido que factores proangiogénicos liberados desde
plaquetas activadas promueven la angiogénesis tumoral, contribuyendo al crecimiento del tumor
y posterior metástasis. El tratamiento actual para el CO incluye cirugía citorreductiva seguido
de quimioterapia, sin embargo, muchas pacientes recurren en la enfermedad a los pocos meses.
Terapia antiangiogénica, un tratamiento alternativo, ha mostrado reducido beneficio clínico y
elevados efectos adversos. Metformina, primera línea de tratamiento para la Diabetes tipo II, ha
mostrado una disminución en el riesgo de desarrollar CO en pacientes diabéticas, sin embargo,
el mecanismo se desconoce. Estudios in vitro han sugerido que Metformina a concentraciones
supra farmacológicas puede tener un efecto antiangiogénico. Sin embargo, no existen reportes
que evalúen el efecto del fármaco sobre el rol proangiogénico de las plaquetas, usando
concentraciones presentes en plasma de pacientes diabéticas,. El objetivo del presente estudio
fue dilucidar el efecto de Metformina a concentraciones terapéuticas sobre la reducción de la
angiogénesis promovida por plaquetas, tanto directamente sobre células endoteliales, como
sobre el potencial angiogénico de células de CO. Cultivo primario proveniente de pacientes con
CO, líneas celulares de CO y cultivo primario de células endoteliales provenientes de vena
umbilical humana (HUVEC) fueron utilizadas en este estudio. Metformina 20µM
(concentración observada en plasma de pacientes diabéticos) reduce significativamente la
angiogénesis (medida utilizando el ensayo in vitro de formación de estructuras tipo capilar)
promovida por la adición directa de plaquetas o Medio Condicionado proveniente de células de
cáncer previamente incubadas con plaquetas. El efecto de Metformina no involucró disminución
en la viabilidad celular o reducción en la activación plaquetaria. Curiosamente, Metformina se
requirió estar presente durante todo el tiempo de la incubación de plaquetas con células
endoteliales para ejercer su efecto antiangiogénico, debido a que un pretratamiento a las células
endoteliales o plaquetas con Metformina no afectaron la angiogénesis promovida por plaquetas.
La adición de Compuesto C (un conocido inhibidor de AMPK, aunque con otras acciones
reportadas) no afecta la acción proangiogénica de las plaquetas sobre células endoteliales,
indicando que la acción de AMPK no es requerida para la activación plaquetaria o promoción
de la angiogénesis. A pesar de que, la presencia de Compuesto C revirtió la acción de
Metformina, no observamos activación de AMPK en células endoteliales y, por ende, futuros
experimentos permitirán identificar las vías de transducción internas usadas por Metformina
para eliminar la respuesta a plaquetas. Nosotros proponemos que concentraciones de
Metformina ya aprobadas para el tratamiento de la diabetes se deben investigar en un ensayo
clínico prospectivo en pacientes con cáncer de ovario que no presenten diabetes.El cáncer de ovario (CO) es el cáncer ginecológico más letal y la 7ª causa de muerte por cáncer
en mujeres. Aproximadamente el 40% de las pacientes con CO presenta un elevado conteo
plaquetario (Trombocitosis), fenómeno que se ha correlacionado independientemente con un
mal pronóstico en estas pacientes. Es sabido que factores proangiogénicos liberados desde
plaquetas activadas promueven la angiogénesis tumoral, contribuyendo al crecimiento del tumor
y posterior metástasis. El tratamiento actual para el CO incluye cirugía citorreductiva seguido
de quimioterapia, sin embargo, muchas pacientes recurren en la enfermedad a los pocos meses.
Terapia antiangiogénica, un tratamiento alternativo, ha mostrado reducido beneficio clínico y
elevados efectos adversos. Metformina, primera línea de tratamiento para la Diabetes tipo II, ha
mostrado una disminución en el riesgo de desarrollar CO en pacientes diabéticas, sin embargo,
el mecanismo se desconoce. Estudios in vitro han sugerido que Metformina a concentraciones
supra farmacológicas puede tener un efecto antiangiogénico. Sin embargo, no existen reportes
que evalúen el efecto del fármaco sobre el rol proangiogénico de las plaquetas, usando
concentraciones presentes en plasma de pacientes diabéticas,. El objetivo del presente estudio
fue dilucidar el efecto de Metformina a concentraciones terapéuticas sobre la reducción de la
angiogénesis promovida por plaquetas, tanto directamente sobre células endoteliales, como
sobre el potencial angiogénico de células de CO. Cultivo primario proveniente de pacientes con
CO, líneas celulares de CO y cultivo primario de células endoteliales provenientes de vena
umbilical humana (HUVEC) fueron utilizadas en este estudio. Metformina 20µM
(concentración observada en plasma de pacientes diabéticos) reduce significativamente la
angiogénesis (medida utilizando el ensayo in vitro de formación de estructuras tipo capilar)
promovida por la adición directa de plaquetas o Medio Condicionado proveniente de células de
cáncer previamente incubadas con plaquetas. El efecto de Metformina no involucró disminución
en la viabilidad celular o reducción en la activación plaquetaria. Curiosamente, Metformina se
requirió estar presente durante todo el tiempo de la incubación de plaquetas con células
endoteliales para ejercer su efecto antiangiogénico, debido a que un pretratamiento a las células
endoteliales o plaquetas con Metformina no afectaron la angiogénesis promovida por plaquetas.
La adición de Compuesto C (un conocido inhibidor de AMPK, aunque con otras acciones
reportadas) no afecta la acción proangiogénica de las plaquetas sobre células endoteliales,
indicando que la acción de AMPK no es requerida para la activación plaquetaria o promoción
de la angiogénesis. A pesar de que, la presencia de Compuesto C revirtió la acción de
Metformina, no observamos activación de AMPK en células endoteliales y, por ende, futuros
experimentos permitirán identificar las vías de transducción internas usadas por Metformina
para eliminar la respuesta a plaquetas. Nosotros proponemos que concentraciones de
Metformina ya aprobadas para el tratamiento de la diabetes se deben investigar en un ensayo
clínico prospectivo en pacientes con cáncer de ovario que no presenten diabetes.
Description
Tesis (Doctor en Ciencias con mención en Ciencias Fisiológicas)--Pontificia Universidad Católica de Chile, 2019